三陰性乳腺癌中COX-2、NF-κB及VEGF表達的臨床研究*

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·論著·

三陰性乳腺癌中COX-2、NF-κB及VEGF表達的臨床研究*

馬玲娣，董燕芬，劉乾，范靜，蔣麗佳，陳亞紅

(南京醫科大學附屬常州市第二人民醫院檢驗科，江蘇常州 213000)

摘要:目的研究環氧酶(COX-2)、核因子-κB(NF-κB)及血管內皮生長因子(VEGF)在三陰性乳腺癌中的表達及臨床意義。方法選取2010年1月至2014年12月于該院進行乳腺癌治療的100例患者為研究對象，其中三陰性乳腺癌50例，非三陰性乳腺癌50例，采用免疫組織化學法檢測100例患者乳腺癌組織中COX-2、NF-κB及VEGF的表達，并應用D2-40標記檢測淋巴管浸潤和淋巴管密度，對相關的臨床病理資料進行統計分析。結果COX-2在三陰性與非三陰性乳腺癌中的表達分別為76%、70%，差異無統計學意義(P>0．05)，VEGF在三陰性乳腺癌病變和非三陰性乳腺癌病變中陽性表達率分別為60%和36%，差異有統計意義(P<0.05)。NF-κB在三陰性乳腺癌病變和非三陰性乳腺癌病變中陽性表達率分別為66%和32%，差異有統計意義(P<0.05)。三陰性乳腺癌組織中乳腺癌中NF-κB與VEGF，COX-2與VEGF表達呈正相關。結論放化療是三陰性乳腺癌術后治療的主要手段，而抑制NF-κB、VEGF和COX-2的表達有望成為治療三陰性乳腺癌的新靶點，值得研究探索。

關鍵詞:三陰性乳腺癌；環氧酶；血管內皮生長因子

乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤之一，成為威脅女性健康的主要病因[1]。三陰性乳腺癌是指雌激素受體、孕激素受體和人表皮生長因子受體均呈現陰性的一種特殊類型的乳腺癌[2]，多發生于絕經前年輕女性，約占所有乳腺癌的15%，具有較強的腫瘤侵襲能力，易于遠處轉移，內臟轉移和腦轉移發生率較高，3年之內為轉移高峰。預后較其他類型乳腺癌差，有較高的死亡風險[3]。三陰性乳腺癌和基底細胞樣型乳腺癌之間存在某些基因表達譜和免疫表型上的差異，對此，本文選取2010年1月至2014年12月于本院進行乳腺癌治療的100例患者為研究對象，采用免疫組織化學法檢測100例乳腺癌組織中環氧酶(COX-2)、核因子-κB(NF-κB)及血管內皮生長因子(VEGF)的表達，并應用D2-40標記檢測淋巴管浸潤和淋巴管密度，對相關的臨床病理資料進行統計分析，取得十分滿意的療效，現將結果報道如下。

1資料與方法

1.1一般資料選取2010年1月至2014年12月于本院進行乳腺癌治療的100例患者為研究對象，患者均為女性,其中三陰性乳腺癌50例，年齡為18～64歲；非三陰性乳腺癌50例，患者均為女性,年齡18～65歲，術前均未行放、化療及免疫治療，術后均經病理組織學證實為乳腺癌。ER、PR、HER-2均為陰性的患者診斷為三陰性乳腺癌。納入標準：明確診斷為乳腺癌，符合三陰性乳腺癌證候標準，試驗前1個月未接受其他腫瘤藥物治療，預計生存期在6個月以上，患者精神、體力尚好，年齡18～65歲。

1.2試驗方法檢測NF-κBp65來表示NF-κB，因為NF-κBp65是NF-κB的主要組成因子,兔抗人NF-κBp65抗體、SABC試劑盒均購自武漢博士德公司。鼠抗人VEGF單克隆抗體、鼠抗人COX-2單克隆抗體均購自Santa Cruz公司，采用SABC法，操作按試劑盒說明書進行。主要包括山羊血清封閉,分別依次滴加抗NF-κBp65、COX-2、VEGF抗體過夜(工作濃度1∶2 000),生物素化二抗及ABC復合物,DAB顯色,蘇木精復染后封片。用PBS代替一抗作陰性對照,用已知乳腺癌陽性片做陽性對照。全部新鮮標本24 h內經4%甲醛固定,常規石蠟包埋，厚4 μm連續切片，均作HE和免疫組織化學染色。

1.3療效評價每張切片分別隨機取共5個區域的細胞計數，每個區計數200個腫瘤細胞，共計數1 000個細胞，計算染色細胞所占比例，NF-κB陽性染色呈淺棕色或深棕色，定位于細胞核。陽性染色細胞數小于10%為表達陰性(-);≥10%為表達陽性(+)。COX-2和VEGF陽性染色陽性細胞呈棕黃或棕褐色顆粒，主要定位于細胞漿。

1.4統計學處理采用統計學軟件SPSS15.0，計量資料采用t檢驗，計數資料采用χ2檢驗，檢驗水準為α=0.05，P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.1三陰性乳腺癌與非三陰性乳腺癌COX-2、NF-κB和VEGF表達率比較COX-2和VEGF陽性染色陽性細胞呈棕黃或棕褐色顆粒，主要定位于細胞漿。COX-2在三陰性乳腺癌的陽性表達率為76%，高于非三陰性乳腺癌的70%，但差異無統計學意義(P>0.05)。然而，VEGF在三陰性乳腺癌病變和非三陰性乳腺癌病變中陽性表達率分別為60%和36%，差異有統計學意義(P<0.05)。NF-κB在三陰性乳腺癌病變和非三陰性乳腺癌病變中陽性表達率分別為66%和32%，差異有統計學意義(P<0.05)。結果見表1(見《國際檢驗醫學雜志》網站主頁“論文附件”)。

2.2三陰性乳腺癌組織中NF-κB與VEGF表達的關系在33例NF-κB陽性標本中,有28例同時存在VEGF陽性表達；而在20例VEGF陰性標本中,有15例伴NF-κB表達缺失,相關分析證實,三陰性乳腺癌組織中NF-κB與VEGF表達呈顯著正相關(P<0.05)，結果見表2。

表2　　三陰性乳腺癌組織中NF-κB與VEGF

表3　　三陰性乳腺癌組織中COX-2與VEGF

2.3三陰性乳腺癌組織中COX-2與VEGF表達的關系在38例COX-2陽性標本中,有29例同時存在VEGF陽性表達；而在20例VEGF陰性標本中,有11例伴COX-2表達缺失,相關分析證實,三陰性乳腺癌組織中COX-2與VEGF表達顯著正相關(P<0.05)。結果見表3。

3討論

NF-κB是一類重要的核轉錄因子，一般情況下，NF-κB以非活性形式存在于胞質，當NF-κB被激活后，NF-κB從胞質轉位于胞核，調節多種細胞激酶、趨化因子、生長因子、細胞黏附因子及早期反應的蛋白質分子基因的轉錄[4]。然而其異常激活將導致細胞不能正常轉導信號，促進細胞癌變。參與細胞增殖、細胞凋亡、炎癥反應和免疫反應[5-6]，近年來研究表明NF-κB異常活化與許多人類疾病，例如乳腺腫瘤、卵巢腫瘤、結腸癌、胰腺癌、前列腺癌以及黑色素瘤等多種實體腫瘤發生、發展和轉移密切相關[7-9]。在本研究中，三陰性乳腺癌病變中 NF-κB 陽性表達率為66%,非三陰性乳腺癌病變中 NF-κB 陽性表達率為32%，顯示在三陰性乳腺癌組織中 NF-κB表達顯著高于非三陰性乳腺癌組織。

COX-2 是一種膜結合蛋白酶，參與新生血管生成、腫瘤細胞增殖，并且抑制凋亡，從而有利于腫瘤的發生、發展。在通常情況下，在乳腺癌患者中具有較高的表達，且與預后密切相關[10]。因此，COX-2在腫瘤轉移中發揮著重要作用[11]。然而，大多數乳房惡性腫瘤的高病死率與腫瘤轉移密切相關[12]。本研究表明COX-2 在三陰性乳腺癌和非三陰性乳腺癌中分別為76% 和 70%，差異無統計學意義(P>0.05)，其主要原因可能在于COX-2 是大多數腫瘤比較普遍的基因表達產物，并且參與乳腺癌發生、發展的多個方面。

VEGF 是一種能夠特異性促使血管內皮細胞增殖，參與內皮細胞活化、遷移、入侵和生存的蛋白，在多種實體惡性腫瘤中具有較高的表達[13]。研究表明，乳腺腫瘤的生長和轉移依賴血管的生成，即從現有的血管形成新的血管網絡。然而，這一過程的主要調節者是VEGF[14]。在本研究中，三陰性乳腺癌病變中 VEGF陽性表達率為60%,非三陰性乳腺癌病變中VEGF陽性表達率為36%，可見在三陰性乳腺癌組織中 VEGF表達顯著高于非三陰性乳腺癌組織。綜上所述，三陰性乳腺癌病變中，COX-2、NF-κB及VEGF均呈現高表達,與非三陰性乳腺癌病變組織相比，NF-κB及VEGF表達差異有統計學意義(P<0.05)。

除此之外，本研究發現NF-κB與VEGF，COX-2與VEGF表達存在明顯正相關。放化療是三陰性乳腺癌術后治療的主要手段，近年來，分子靶向治療成為了研究的焦點，但目前尚無標準的治療方法[15]。COX-2、NF-κB和VEGF 在三陰性乳腺癌中高表達，且NF-κB與VEGF，COX-2與VEGF表達存在明顯正相關。因此，抑制NF-κB、VEGF和COX-2的表達有望成為治療三陰性乳腺癌的新靶點。

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Clinical research on COX-2,NF-κB and VEGF expression in triple negative breast cancer*

MaLingdi,DongYanfen,LiuQian,FanJing,JiangLijia,ChenYahong

(DepartmentofClinicalLaboratory,ChangzhouSecondPeople′sHospitalAffiliatedtoNanjingMedicalUniversity,Changzhou,Jiangsu213000,China)

Abstract:ObjectiveTo study the cyclooxygenase (COX-2),nuclear factor-κB (NF-κB) and vascular endothelial growth factor (VEGF) expression and clinical significance in triple negative breast cancer.MethodsFrom January 2010 to December 2014,breast cancer treatment in our hospital 100 patients for the study,50 patients with triple negative breast cancer,50 cases of non-triple negative breast cancer was detected by immunohistochemistry，100 cases of breast cancer were detected by immunohistochemistry in organizations COX-2,NF-κB and VEGF expression of lymphatic vessel invasion and lymph vessel density and D2-40 mark detection,statistical analysis of relevant clinical and pathological information.ResultsCOX-2 in triple negative and non-triple negative breast cancer were 76%,70%,the difference was not statistically significant (P>0.05),VEGF triple negative breast cancer and non-triple negative breast lesions in cancerous lesions positive expression rates of 60% and 36%,respectively,which had significant difference (P<0.05).NF-κB in triple negative breast cancer lesions and non-triple negative breast lesions positive expression rate was 66% and 32%,respectively,which had significant difference (P<0.05).Triple negative breast cancer NF-κB and VEGF,COX-2 and VEGF expression was significantly positively related to breast cancer.ConclusionRadiation and chemotherapy is a major means of triple negative breast cancer postoperative treatment,while inhibiting the NF-κB,the expression of VEGF and COX-2 is expected to become the new target for treatment of triple negative breast cancer,is worth exploring.

Key words:triple negative breast cancer; cyclooxygenase;vascular endothelial growth factor

(收稿日期：2015-11-28)

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.04.002

文獻標識碼：A

文章編號：1673-4130(2016)04-0436-03

基金項目：國家自然科學基金資助項目(81101647)。

作者簡介：馬玲娣，女，副主任技師，主要從事腫瘤免疫及中藥抗腫瘤研究。