不同檢測系統尿微量清蛋白測定結果的可比性及偏倚評估

黃　舒,熊海燕,洪煜婧

(1.南通市第一人民醫院檢驗科，江蘇南通 226001；2.南通大學公共衛生學院，江蘇南通 226001)

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·臨床研究·

不同檢測系統尿微量清蛋白測定結果的可比性及偏倚評估

黃舒1,熊海燕1,洪煜婧2

(1.南通市第一人民醫院檢驗科，江蘇南通 226001；2.南通大學公共衛生學院，江蘇南通 226001)

摘要:目的對兩種不同檢測系統尿微量清蛋白測定結果進行方法比對和偏倚評估，探討其可比性。方法參照美國臨床和實驗室標準化協會(CLSI)EP9-A2文件要求，以BeckmanIMMAGE800全自動免疫分析儀作為比對方法(X)，日立7600全自動生化分析儀為實驗方法(Y)，用患者新鮮尿液分別用上述不同檢測系統同時檢測微量清蛋白，計算實驗方法(Y)和比對方法(X)之間的相對偏差(SE%)，以衛生部臨檢中心室間質評允許誤差(Ea)范圍的1/2為判斷標準，評價各系統測定結果的可比性。結果實驗系統與比較系統間具有良好的相關性(r=0.998)；比較方法檢測結果為(80.8±55.2)mg/L，實驗方法為(84.9±57.7)mg/L，經配對設計的t檢驗，差異有統計學意義(t=9.504，P<0.01)，實驗方法明顯高于比較方法；但以臨床可接受性能判斷標準(SE%<1/2 CLIA′88 TEa)，認為實驗系統的檢測結果可接受。結論上述不同檢測系統檢測結果具有較好的相關性，臨床可接受性能評價具有可比性。經過方法對比及偏差評估確定在該實驗室使用生化儀替代免疫儀檢測是可行的。

關鍵詞:微量清蛋白；方法比對；偏倚評估

由于不同檢測系統的性能，檢測原理、方法等不同，儀器間可能存在系統誤差，在申請臨床醫學實驗室認可時要進行不同檢測系統測定結果的可比性檢驗和偏倚評估；本科現有貝克曼庫爾特IMMAGE800全自動免疫分析儀和日立7600全自動生化分析儀兩臺儀器，均可檢測尿微量清蛋白，為評價兩者測定結果的可比性，需對儀器進行比對，多項報道認為IMMAGE800檢測微量蛋白時具有高濃度的自動稀釋功能，精密度、準確度高，線性范圍寬。把它作為目標檢測系統，將日立7600全自動生化分析儀測定結果與其進行比較，本研究參考美國臨床和實驗室標準化協會(CLSI)EP9-A2文件進行方法比對和偏差評估。

1材料與方法

1.1檢測系統組成

1.1.1檢測系統X貝克曼庫爾特公司IMMAGE800全自動免疫分析儀及配套試劑、校準品、質控品，采用散射速率法分析。儀器按尿微量清蛋白標準操作程序進行定標，并判斷定標測試的有效性，存儲工作曲線，測試樣品根據有效定標工作曲線計算測試結果。

1.1.2檢測系統Y日立7600全自動生化分析儀，北京利德曼生產試劑盒。檢測類型：雙波長，兩點終點法；反應方向：上升；定標方式：Logit Log 5P；線性范圍:0～200 mg/L。

1.2方法

1.2.1樣本收集與檢測每天收集2份(病史相同)新鮮尿液標本，1 500×g離心10 min，分別取上清液，混合，制成8份不同尿微量清蛋白濃度的“微混合樣本”。同時在兩臺儀器上進行平行雙份檢測,連續測定5 d。

1.2.2評估方案前準備包括儀器的常規保養，校準，質控，樣本準備等，嚴格執行標準操作規程，室內質控在控后進行標本檢測，分別在兩臺儀器進行檢測，先1→8順序進行測定，再8→1順序重復測定，每日測定均在2 h內完成。

1.2.3檢測方法按照CLSI批準的EP9-A2文件《用患者樣本進行方法比對及偏倚評估》[1]，對兩種方法檢測尿微量清蛋白結果進行比對，以貝克曼庫爾特IMMAGE800全自動免疫分析儀作為比對方法(X)，日立7600全自動生化分析儀為實驗方法(Y)，分別用兩種不同檢測系統同時檢測尿微量清蛋白，作圖，計算回歸方程，判斷兩組結果有無差異，依據已建立的回歸方程，以醫學決定水平作為自變量(Xc)，計算因變量Yc，再依據Xc和Yc算出預期偏倚(Bc)(系統誤差，SE)和相對偏倚(SE%):Bc=|Yc-Xc|=|(b-1)Xc+a|，SE(%)=(Bc/Xc)×100%。臨床可接受性判斷：以衛生部臨檢中心室間質評允許誤差(Ea)范圍的1/2為判斷標準：當SE(%)小于或等于1/2 Ea時，則認為偏倚可接受；當SE(%)大于1/2時，則認為偏倚不可接受。

1.3統計學處理剔除存在明確人為操作誤差的結果。以4倍的平均差值為判斷限刪除離群點，方法內及方法間不應超出限值，超過限值的即為離群點，所有差值都應刪除并補足數據。明顯人為誤差的結果予以剔除。兩個檢測系統尿微量清蛋白測定結果的統計分析按照EP9-A2文件的要求在SPSS13.0上進行分析，以P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.2相關性

圖1　　重復測定均值的散點圖

圖2　　各次測定結果的散點圖

圖3　兩種方法測定均值之差對兩種方法測定

圖4　　偏倚圖

2.3實驗方法檢測系統可接受性能評價按CLIA′88(2003)要求，尿微量清蛋白分析允許最大總誤差(TEa)為±20%，醫學決定水平Level1=25 mg/L和Level2=100 mg/L。將尿微量清蛋白的Xc代入回歸方程，計算SE、SE%,得SE%分別為6.4%，5.0%，參考臨床可接受性能的判斷標準(SE%<1/2 CLIA′88 TEa)，均可接受。

2.4兩方法均值比較結果比對方法檢測結果為(80.8±55.2)mg/L，實驗方法為(84.9± 57.7)mg/L，經配對設計的t檢驗，差異有統計學意義(t=9.504，P<0.01)，實驗方法明顯高于比較方法。

3討論

尿微量清蛋白曾被認為是高血壓、糖尿病等疾病所致腎功能損害的表現[2-3]。而目前的學說認為，尿微量清蛋白是由于全身血管的滲漏而非特定的腎臟損害所致[4]。在檢測方面隨機尿較為常用，但影響因素較多，若同時檢測尿肌酐，因每日肌酐排除量相對恒定，用尿微量清蛋白與肌酐比值可避免尿量等變化對結果的影響。其比值對腎病的早期診斷有重要價值[5-6]。尿微量清蛋白/肌酐比值的升高與全身血管內皮細胞的病變是同步的，是全身或局部炎性反應的指標，是血管內皮細胞改變的早期征象，與血管病變的發生密切相關[7-8]。已有國外研究表明尿微量清蛋白與肌酐比值與心血管疾病的嚴重程度密切相關，是心血管疾病的獨立危險因素及預測因子之一，并且與心血管疾病意外病死率密切相關[9-10]。2001年美國糖尿病協會尿討論認為微量清蛋白/尿肌酐比值可代替24 h尿檢測，后逐漸被臨床廣泛應用[11]。放射免疫分析最早用于測定尿微量清蛋白，其精確度、靈敏度均高，存在放射性污染及特殊儀器需要等缺陷，開展受到限制。隨后商品給的尿微量清蛋白檢測試劑品種繁多。以速率散射濁度為代表的IMMARE免疫濁度分析儀，其精密度、準確度高，還具有快速、方便等優點，是目前應用最為廣泛的一種方法。基于全自動生化分析儀使用的透射免疫比濁法試劑的研發，為尿微量清蛋白的檢測開辟了另一途徑。而肌酐的檢測目前臨床實驗室的常用方法為生化儀的苦味酸速率法和肌氨酸氧化酶法。隨著臨床醫生對尿微量清蛋白臨床意義的認識逐漸加深，尿微量清蛋白/尿肌酐比值增高從監測腎損害，逐漸被臨床廣泛應用于協助早期發現心血管疾病的風險。隨之而來的是尿微量清蛋白檢測標本的不斷增加，尿微量清蛋白測定目前主要采用貝克曼庫爾特IMMAGE800特定蛋白分析系統。而肌酐的檢測多用全自動生化分析儀。這樣就出現一個指標要運用兩種儀器檢測的情況。基于全自動生化分析儀可使用透射免疫比濁法檢測尿微量清蛋白，可避免上述麻煩，但尿微量清蛋白檢測結果的準確性和一致性越來越多地引起大家的關注。由于方法學的差異，以及采用的參考測量程序和校準品溯源性的不同，將會導致檢測結果存在一定的差異。不同檢測系統測定同一份尿液中的微量清蛋白濃度往往不具有可比性。因此，應對不同檢測系統尿微量清蛋白測定結果進行方法比對和偏倚評估。

本研究根據CLSI EP9-A2文件的流程，對兩檢測系統測定結果進行比對，結果顯示：方法內、方法間沒有離群值，重復性好，相關性好(r=0.998)，偏差估計顯示，兩種檢測系統測定結果間的差異較為顯著，如圖所知：兩種方法結果存在差異，直接比較兩種方法所得的檢測結果并不一致，透射免疫比濁法的檢測結果要高于散射速率法結果，濃度越高，差異越大。根據前述圖形分析及相關回歸分析可知，在分析范圍內檢測醫學決定水平濃度的尿微量清蛋白的相對偏差較小，可滿足臨床要求，高值標本可稀釋或減量檢測，也可根據回歸方程對檢測結果進行系數調整，確保兩方法間的一致性與可比性。

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(收稿日期：2015-09-25)

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.04.053

文獻標識碼：A

文章編號：1673-4130(2016)04-0548-03