VEGF在多囊腎發生發展中的水平變化及機制探討

陳靜　朱鴻鵬　涂曉文

[摘 要] 目的：探討血管內皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）在多囊腎（Polycystic kidney disease，PKD）發生發展中的水平變化及機制，為PKD的臨床治療提供新的思路。方法：以我院2012年8月—2015年8月收治的118例PKD患者為研究對象，納入觀察組，并按照其腎小球濾過率（Glomerular filtration rate，GFR）狀態，將GFR≥25 mL/min患者納入高濾過率組，將GFR<25 mL/min患者納入低濾過率組，此外，選取同期50例腎透明細胞癌患者，納入對照組。比較觀察組患者腎壁組織、對照組患者癌旁正常腎組織VEGF表達水平，并分析VEGF與觀察組患者GFR的關系。結果：觀察組VEGF表達等級高于對照組，其VEGF陽性率為83.05%，亦高于對照組的54.00%，差異有統計學意義（P<0.05）。高濾過組VEGF表達等級高于對照組，其VEGF陽性率為97.96%，亦高于對照組的72.46%，差異有統計學意義（P<0.05）。結論：VEGF在PKD的發生過程中扮演了重要角色，隨著腎纖維化嚴重程度的逐漸增加，PKD腎臟組織VEGF表達逐漸下降，PKD早期實施VEGF抑制治療、PKD中晚期實施VEGF補充治療有望成為改善PKD患者預后質量的新途徑。

[關鍵詞] 血管內皮生長因子；多囊腎；腎小球濾過率；機制

中圖分類號：R692 文獻標識碼：B 文章編號：2095-5200（2016）05-020-03

DOI：10.11876/mimt201605008

多囊腎（Polycystic kidney disease，PKD）是一種常染色體遺傳病，患者以腎臟皮質及髓質出現大量囊腫為主要病理生理改變，囊腫對腎組織的持續擠壓可導致腎實質損害，并引發血尿、蛋白尿等臨床癥狀，部分患者可因毒素積累發生尿毒癥，生存質量受到嚴重威脅[1]。目前臨床對PKD的發病機制尚無明確闡釋，多數學者認為，囊腫襯里上皮細胞過度增殖、囊腫周圍新生血管生成是導致PKD發生發展的主要原因[2]。研究發現，血管內皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）可參與小鼠PKD模型新生血管生成環節，導致囊腫增多、增大及腎臟組織纖維化[3]，但關于VEGF在PKD患者發病機制中作用研究較為缺乏。本研究探討VEGF在PKD發生發展中的水平變化及機制，希望為PKD發病機制及治療方案的指導提供新的思路。

1 資料與方法

1.1 一般資料

以我院2012年8月—2015年8月收治的118例PKD患者為研究對象，均接受去頂減壓術治療，并經術后病理組織學檢查確診PKD[4]，排除合并腎臟嚴重感染、自發性出血、難治性高熱、惡性腫瘤者，納入觀察組，并按照其腎小球濾過率（Glomerular filtration rate，GFR）狀態，將GFR≥25 mL/min患者納入高濾過率組，將GFR<25 mL/min患者納入低濾過率組[5]，此外，選取同期50例腎透明細胞癌患者，均經術后病理組織學檢查明確診斷且癌旁組織為正常腎組織，納入對照組。觀察組男79例，女39例，年齡32～51歲，平均年齡（40.85±5.42）歲；對照組男33例，女17例，年齡30～55歲，平均（41.07±6.38）歲。兩組患者性別、年齡比較，差異無統計學意義，具有可比性。

1.2 研究方法

1.2.1 標本取材 觀察組標本取自于術中新鮮多囊腎壁組織，對照組標本取自術中癌旁組織，標本自腎透明細胞癌邊緣≥5 cm且病理組織學檢查未見癌細胞。標本取出體內后立即以10%中性福爾馬林固定，行乙醇和二甲苯脫水、透明，石蠟包埋，保存待測。

1.2.2 檢測方法 使用免疫組化染色法檢測待測標本VEGF表達情況，檢測方法[6]：實施切片脫蠟、水化，以PBS沖洗后行抗原修復，而后置于3% H2O2去離子水中，室溫孵育10 min，PBS沖洗并滴加適當比例稀釋后一抗，置于恒溫孵育箱內，37℃孵育1 h；PBS沖洗并滴加二抗，置于恒溫孵育箱內，37℃孵育30 min。最后實施DAB顯色、蘇木素復染、梯度酒精脫水、二甲苯透明、樹膠封片，以PBS代替一抗為陰性對照，實施結果判定。

1.2.3 結果判定 于光學顯微鏡（×400）下，采用半定量5分評分法，選取10個不重疊的視野，根據VEGF在標本內染色強弱深度及染色范圍進行結果判定，判定標準[7]：染色強度：0分：無著色；1分：淺著色，視野內可見棕黃色片狀染色；2分：深著色，視野內可見棕黃色大顆粒或棕黑色染色；染色范圍：1分：棕黃色染色范圍≤25%；2分：棕黃色染色范圍25%～50%；3分：棕黃色染色范圍50%～75%；4分：棕黃色染色范圍≥75%。以染色強度及染色范圍評分之和為分級標準，總分<2分為（﹣），2分≤總分<3分為（+），3分≤總分<4分為（++），總分≥4分為（+++），其中（﹣）、（+）為低表達（陰性），（++）、（+++）為高表達（陽性）。

1.3 分析方法

比較VEGF在PKD腎臟組織、正常腎組織中表達情況，總結VEGF在PKD發生過程中發揮的作用，并比較VEGF在不同腎功能的PKD腎臟組織中表達情況，探討VEGF在PKD發展過程中扮演的角色。

1.4 統計學分析

對本臨床研究的所有數據采用SPSS18.0進行分析，計數資料以（n/%）表示，并采用χ2檢驗，等級資料采用秩和檢驗，計量資料以（x±s）表示，滿足方差齊性則采用獨立樣本t檢驗，若方差不齊，則采用校正t檢驗，以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 PKD腎臟組織、正常腎組織中VEGF表達情況

觀察組VEGF陽性率為83.05%，亦高于對照組的54.00%，差異有統計學意義（P<0.05）。

2.2 不同腎功能PKD腎臟組織中VEGF表達情況

觀察組118例患者中，49例患者GFR≥25 mL/min，納入高濾過組，其余69例患者GFR<25 mL/min，納入低濾過組。高濾過組VEGF表達等級高于對照組，其VEGF陽性率為97.96%，亦高于對照組的72.46%，差異有統計學意義（P<0.05）。見表2。

3 討論

PKD是全球范圍內發病率最高的單基因遺傳性疾病，約有接近80%的患者在77歲前可進展至終末期腎病甚至死亡，對社會及家庭造成了沉重負擔[8]。由于目前醫學界對PKD的發病機制尚未完全明確，仍缺乏特異性治療藥物，臨床治療重點多集中于緩解疼痛、血尿、高血壓等并發癥，在預防或延緩PKD進展方面具有一定意義，但無法阻止PKD自然病程的進展[9]。

終末期腎病的特征為腎臟發生不可逆性的纖維化，而腎臟纖維化程度與腎臟損傷程度具有較高的一致性[10]。在腎臟纖維化的發生過程中，上皮間質轉化（EMT）是其必經之路及重要機制，當腎臟發生EMT時，腎小管上皮細胞間緊密連接特性消失，細胞膜粘連受體顯著減少，從而逐漸出現間質細胞特征。李林等[11]研究發現，PKD小鼠模型腎臟纖維化過程中，部分成纖維母細胞可能來源于腎小管上皮組織向間質細胞轉化，進一步印證了PKD發生發展過程中EMT發揮的重要作用。此外，Seeger等[12]指出，腎臟囊腫發展過程與腫瘤發展相似，亦需要大量氧氣及營養物質，以保證能量供應及發育活性，故往往伴有微小毛細血管的廣泛生長。

作為一種促進內皮細胞增生、毛細血管生成的關鍵因子，VEGF具有激活并刺激血管內皮細胞、啟動新生血管發育、調節新生血管塑造成形功能，可能在PKD發生的EMT及血管廣泛生長環節扮演了重要角色[13]。本研究結果示，PKD病變腎臟組織VEGF表達等級及陽性率均高于正常組織，說明VEGF在PKD的發生中占據著重要地位。景穎等[14]指出，正常腎臟內，VEGF主要表達于足細胞、遠端腎小管及集合管上皮細胞，在缺血缺氧引發的急性腎功能衰竭中，VEGF表達明顯增高，并通過刺激VEGF-2介導的信號級聯反應，發揮抑制內皮細胞凋亡、保護內皮細胞、加速腎臟康復作用，并通過刺激血管生成，促進腎小球病變恢復。該結果表明，在PKD發生早期，VEGF表達呈上升狀態，以拮抗腎臟損傷，延緩EMT進程。

通過上述研究，可以發現，VEGF在PKD發生過程中發揮了重要作用，而隨著VEGF的升高，患者成纖維細胞增殖、成纖維細胞向肌成纖維轉化不斷加劇，往往導致腎臟組織纖維化程度上升[15]。但本研究結果示，高濾過組VEGF表達等級及陽性率高于低濾過組，說明隨著患者腎臟纖維化程度的加劇，其VEGF表達逐漸下降，與上述猜測存在矛盾，其原因可能為：隨著腎臟纖維化程度的加劇，損傷血管內皮轉化能力及血管緊張度逐漸下降，且腎小球周圍正常的皮質毛細血管網絡系統逐漸喪失[16-17]，導致VEGF的維持血管內皮細胞生存、發展及功能的作用無法發揮，故VEGF逐漸降低。同時，Chen等[18]發現，結扎小鼠單側輸尿管后，其VEGF濃度表達明顯降低，而應用藥物減輕腎臟纖維化程度后，其VEGF濃度有所恢復，印證了上述結論。

綜上所述，VEGF在PKD發生發展中扮演了重要角色，PKD發病早期，VEGF表達明顯上升，以促進血管內皮細胞生成、誘導EMT過程，但隨著患者腎臟纖維化程度的加劇，VEGF表達逐漸下降。針對PKD患者病情，實施抑制VEGF表達或上調VEGF表達治療，有望為其病情進展的延緩及預后質量的改善提供新的思路。

參 考 文 獻

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