β—catenin和VEGF在基底細胞癌中的表達及其相關性

黃洪欣　杜興莉　姜長青

【摘要】 目的 探討β-連環素（β-catenin）和血管內皮生長因子（VEGF）在皮膚基底細胞癌（BCC）組織中的表達相關性及其意義。方法 應用免疫組化Polymer方法檢測42例皮膚BCC和27例皮膚組織慢性炎的β-catenin和VEGF的表達情況。結果 β-catenin在BCC和皮膚組織慢性炎陽性表達率分別為95.2%和11.1%， 比較差異具有統計學意義（P<0.01）；VEGF在皮膚組織慢性炎和BCC中陽性表達率分別為22.2%和90.5%， 比較差異具有統計學意義（P<0.01）。β-catenin和VEGR均呈陽性表達38例， 2例是β-catenin陽性， 而VEGF陰性2例， 兩者均為陰性2例， 皮膚BCC中β-catenin與VEGF呈正相關（r=0.567， P<0.01）。結論 BCC中β-catenin異位表達可能是VEGF高表達的重要原因， 其在BCC發生中可能起重要作用。

【關鍵詞】 基底細胞癌；β-連環素；血管內皮生長因子

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2016.29.022

皮膚BCC癌可能起源于不分化的多能表皮干細胞， 發病機制中β-catenin在Wnt信號途徑中異常活化起到了關鍵作用。VEGF是強效且特異的促腫瘤血管生長因子， 近年來β-catenin的致腫瘤作用及促血管生成作用已成為研究熱點[1]， 但兩者在BCC中的作用還需更進一步的深入研究， 為此， 作者應用免疫組化Polymer法檢測皮膚BCC中β-catenin和VEGF的表達， 初步探討兩者在皮膚BCC發生中的關聯。

1 材料與方法

1. 1 材料來源 收集2012～2016年青島市立醫院手術切除的42例皮膚BCC和27例皮膚組織慢性炎標本， 患者年齡45～86歲， 一抗β-catenin和VEGF及二抗試劑盒均購自北京中杉金橋生物技術有限公司， 工作濃度1∶100。

1. 2 方法

1. 2. 1 免疫組化染色 切片依次脫蠟水化， 加3%的雙氧水15 min后蒸餾水洗片3次， 修復抗原后用磷酸緩沖鹽溶液（PBS）洗3次， 加一抗4℃冰箱過夜， PBS洗3次后加二抗孵育20 min， DAB顯色、蘇木素液復染、梯度脫水、二甲苯透明、中性樹膠封片、光鏡觀察。

1. 2. 2 結果判定 β-catenin染色結果依據Maruyama等[2]的方法：細胞膜陽性表達率>70%為正常表達， 不足判定為表達減弱或缺失， 胞漿或胞核陽性表達率>10%判定為異位表達。VEGF染色結果依據許良中等[3]的方法：染色強度無著色0分， 淡黃色1分， 棕黃色2分， 棕褐色3分， 著色細胞占計數細胞百分比率為0者記0分， <10%為1分， 10%～50%為2分， 51%～75%為3分， >75%為4分。染色強度與陽性細胞百分比相乘， <3分者為陰性， ≥3分者為陽性。

1. 3 統計學方法 采用SPSS17.0統計學軟件對數據進行統計分析。計數資料以率（%）表示， 采用χ2檢驗；兩種蛋白相關性分析采用 Spearman 等級相關檢驗。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2. 1 β-catenin和VEGF的表達 β-catenin在BCC和皮膚組織慢性炎陽性表達率分別為95.2%（40/42）和11.1%（3/27）， 比較差異具有統計學意義（P<0.01）；VEGF在皮膚組織慢性炎和BCC中陽性表達率分別為22.2%（6/27）和90.5%（38/42）， 比較差異具有統計學意義（P<0.01）。

2. 2 皮膚BCC中β-catenin與VEGF關聯性分析 β-catenin和VEGR均呈陽性表達38例， 2例是β-catenin陽性， 而VEGF陰性2例， 兩者均為陰性2例， 皮膚BCC中β-catenin與VEGF呈正相關（r=0.567， P<0.01）。

3 討論

β-catenin信號通路已成為近年來腫瘤生物學研究的熱門課題， 當Wnt通路的某一環節出現異常， 就會使得β-catenin異常積聚入細胞核， 激活核內相關因子， 發揮其致癌與病理作用[4]。在皮膚腫瘤如黑素瘤、鮑恩病、BCC、鱗狀細胞癌中均存在膜表達減少， 胞漿及胞核表達增強[5]。本研究結果表明β-catenin在皮膚BCC中呈現陽性表達率高達95.2%， 與其在皮膚組織慢性炎11.1%的低陽性表達率比較， 差異具有統計學意義（P<0.01）， 提示β-catenin的異位表達與皮膚BCC的發生關系密切。VEGF作為作用最強、特異性最高的促血管生長因子之一， 有研究發現VEGF在肺癌、腎癌、胃癌、食管鱗狀細胞癌等多種腫瘤中呈高表達[6]。本研究結果顯示， 在皮膚BCC中VEGF蛋白的陽性表達率明顯高于皮膚組織慢性炎的表達率， 差異具有統計學意義（P<0.01）， 這與Bowden等[7]研究結果相似， 說明VEGF的高表達與皮膚BCC的發生也有密切關系。

近年研究表明， VEGF含有β-catenin道路的下游靶基因β-catenin /Tcf-4復合體的結合位點[6]， 因此突變的β-catenin 與 Tcf-4 位點結合， 啟動下游靶基因 VEGF的表達上調。本研究結果顯示， BCC中β-catenin和VEGR都呈高表達且有顯著關聯性， 也說明在皮膚BCC發生病變過程中， Wnt通路出現異常， 突變的β-catenin增多導致VEGF 表達增高。

本實驗初步探討β-catenin和VEGF在皮膚BCC中的表達及其關聯性， 然而需明確二者在皮膚BCC中的作用機制， 仍需應用多方法深入且細致研究， 并應與臨床皮膚BCC的治療緊密結合。

參考文獻

[1] Klaus A， Birchmeier W. Wnt signalling and its impact on development and cancer. Nat Rev Cancer， 2008（8）：387-398.

[2] Maruyama K， Ochiai A， Akimoto S， et al. Cytoplasmic beta-catenin accumulation as a predictor of hematogenous metastasis in human colorectal cancer. Oncology， 2000（59）：302-309.

[3] 許良中， 楊文濤. 免疫組織化學反應結果的判斷標準. 中國癌癥雜志， 1996（6）：229-231.

[4] Jamieson C， Sharma M， Henderson BR. Targeting the β-catenin nuclear transport pathway in cancer. Semin Cancer Biol， 2014（27）：

20-29.

[5] Nelson WJ， NusseR. Convergence of Wnt， bete-catenin， and cadherinpathways. Science， 2004， 303（5663）：1483-1487.

[6] 劉宣， 王炎， 殷佩浩， 等. Wnt /β-catenin 信號通路對人腸癌細胞VEGF 表達的調控作用. 中國癌癥雜志， 2012， 22（12）：881-885.

[7] Bowden J， Brennan PA， Umar T， et al. Expression of vascular endothelial growth factor in basal cell carcinoma and cutaneous squamous cell carcinoma of the head and neck. J Cutan Pathol， 2002， 29 （10）：585-589.

[收稿日期：2016-09-26]