五金化石方對膽色素結石性膽囊炎模型豚鼠血清炎性因子的影響

劉禎發

【摘 要】目的：探討五金化石方對膽色素結石性膽囊炎模型豚鼠血清IL-6、TNF-α含量及膽囊黏膜TNF-α mRNA的表達的影響。方法：120只健康豚鼠隨機分為空白對照組、模型對照組、陽性藥物對照組、五金化石方低、中、高劑量組，每組20只。除空白對照組外，其余5組按照復制膽色素結石性膽囊炎模型，造模成功后，各組給予相應的藥物灌胃4周。各組給藥結束后第2天，采集各組血液標本檢測血清IL-6、TNF-α含量，膽囊標本進行TNF-α mRNA表達的檢測。結果：與模型對照組比較，五金化石方低、中、高劑量組血清IL-6、TNF-α含量及膽囊組織TNF-α mRNA表達明顯降低（P<0.05）。五金化石方高劑量血清IL-6、TNF-α含量及膽囊組織TNF-α mRNA表達與陽性藥物對照組比較，差異有統計學意義（P<0.05）。結論：五金化石方能降低實驗性膽色素結石性膽囊炎模型豚鼠血清IL-6、TNF-α含量及膽囊組織TNF-α mRNA表達。

【關鍵詞】五金化石方；膽囊炎；膽汁量；炎性因子；白細胞介素6；腫瘤壞死因子α

近年來研究表明，中醫藥在治療膽囊炎具有獨特作用[1]。五金化石方為我院治療結石經驗方，具有消炎、利膽、溶石、化石作用，臨床上主要用于治療膽石癥、膽囊炎等病癥，本研究觀察五金化石方對膽色素結石性膽囊炎模型豚鼠血清IL-6、TNF-α含量及膽囊黏膜TNF-α mRNA的表達的影響，進一步探討五金化石方治療膽囊炎的可能作用機制。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

健康豚鼠120只，雄性，體重（280±20）g，普通級，購貴州醫科大學實驗動物中心，許可證號SCXK（黔）2016-18。

1.2 實驗藥物

五金化石方（處方金錢草、海金沙、郁金、虎杖、茵陳、雞殼子、大黃、柴胡、雞內金、石韋、茯苓、豬苓、王不留行、赤芍、延胡索、烏藥、甘草等16味藥物組成）。購于貴州省惠水縣人民醫院中藥房，藥材標準按照《中國藥典》2015版中有關標準進行，實驗時將五金化石方常溫下制成水煎液，質量濃度為2.0g/mL；消炎利膽片（國藥準字Z44020528，惠州大亞制藥有限公司，批號20180604）。

1.3 實驗方法

1.3.1 分組、造模及給藥

120只健康雄性豚鼠，按照數字隨機法分為空白對照組（蒸餾水）、模型對照組（蒸餾水）、陽性藥物對照組（消炎利膽片3.0g/Kg）、五金化石方低（3.0g/Kg）、中（6.0g/Kg）、高（12.0g/Kg）劑量組6組，每組20只。除正常對照組外，其余5組豚鼠皮下注射鹽酸林可霉素60mg/kg/d，連續4d，停2d，再注射3d。進行膽囊B超檢查觀察豚鼠膽囊情況，然后再進行皮下注射鹽酸林可霉素60mg/kg/d，連續15d。實驗性豚鼠膽色素結石性膽囊炎造模結束后。各組給予相應的藥物灌胃4周。

1.3.2 標本采集

各組給藥結束后第2天，采集各組血液標本制備血清及收集各組膽囊標本，置-20℃冰箱保存。

1.4 檢測指標

（1）血清IL-6、TNF-α測定：嚴格按照試劑盒說明書操作，檢測各組豚鼠血清IL-6、TNF-α表達。

（2）膽囊組織中TNF-α mRNA的表達：按照文獻的方法進行檢測。

1.5 統計學分析

數據統計采用SPSS17.0軟件進行，計量資料采用單因素方差分析（ANOVA），多重比較采用LSD檢驗，P<0.05差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 各組血清IL-6、TNF-α含量比較

與空白對照組比較，模型對照組血清IL-6、TNF-α含量明顯升高（P<0.05）；與模型對照組比較，五金化石方低、中、高劑量組血清IL-6、TNF-α含量明顯降低（P<0.05）。五金化石方高劑量組血清IL-6、TNF-α含量與低劑量組比較，差異有統計學意義（P<0.05），五金化石方高劑量血清IL-6、TNF-α含量與陽性藥物對照組比較，差異有統計學意義（P<0.05）。表1。

2.2 各組膽囊組織中TNF-α mRNA表達比較

與空白對照組比較，模型對照組膽囊組織中TNF-α mRNA表達明顯升高（P<0.05）；與模型對照組比較，五金化石方低、中、高劑量組膽囊組織中TNF-α mRNA表達明顯降低（P<0.05）。五金化石方高劑量組膽囊組織中TNF-α mRNA表達與低劑量組比較，差異有統計學意義（P<0.05），五金化石方高劑量膽囊組織中TNF-α mRNA表達與陽性藥物對照組比較，差異有統計學意義（P<0.05）。表2。

3 討論

現代醫學認為，膽囊炎膽囊黏膜存在大量的炎細胞浸潤，膽汁酸代謝途徑障礙，導致膽固醇清除能力下降，膽囊炎時充血、水腫，炎性細胞浸潤發生炎性反應。臨床上治療結石性膽囊炎有效的藥物較少，尤其能夠溶解多種膽囊結石的藥物更是少見。五金化石方能治療結石性膽囊炎療效確切。本文結果顯示，與模型對照組比較，五金化石方低、中、高劑量組血清IL-6、TNF-α含量及膽囊組織TNF-α mRNA表達明顯降低（P<0.05）。五金化石方高劑量組血清IL-6、TNF-α含量及膽囊組織TNF-α mRNA表達與低劑量組比較，差異有統計學意義（P<0.05），五金化石方高劑量血清IL-6、TNF-α含量及膽囊組織TNF-α mRNA表達與陽性藥物對照組比較，差異有統計學意義（P<0.05）。五金化石方能降低血清IL-6、TNF-α含量及膽囊組織TNF-α mRNA表達。提示該方對膽囊炎疼痛有很好的緩解作用。

參考文獻

[1]徐迎濤，孫雪萍.加味大柴胡湯治療膽囊炎的實驗研究[J].中國實驗方劑學雜志，2013，19（03）：234-237.