EGFR及VEGF在漢族與維吾爾族女性三陰性乳腺癌中的表達差異分析

蔣威華，李涌濤，王曉文，張明帥，張晨光，伊麗娜，歐江華新疆醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院乳腺外科二病區(qū)， 新疆　烏魯木齊　830011

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EGFR及VEGF在漢族與維吾爾族女性三陰性乳腺癌中的表達差異分析

蔣威華，李涌濤，王曉文，張明帥，張晨光，伊麗娜，歐江華
新疆醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院乳腺外科二病區(qū)， 新疆烏魯木齊830011

［摘要］背景與目的：三陰性乳腺癌（triple-negative breast cancer，TNBC）是目前乳腺癌研究關(guān)注的焦點。有研究顯示，不同民族其分子生物學(xué)特征也不盡相同。該研究旨在分析漢族及維吾爾族女性TNBC患者表皮生長因子受體（epidermal growth factor receptor，EGFR）、血管內(nèi)皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）的表達情況，了解其與預(yù)后間的關(guān)系。方法：選擇新疆醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院2007年1月—2009年1月收治的漢族、維吾爾族女性TNBC患者167例，其中漢族患者121例，維吾爾族患者46例，應(yīng)用PV-9000免疫組織化學(xué)染色方法測定其EGFR、VEGF的表達狀態(tài)，并與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況及臨床分期進行比較，結(jié)果采用用SPSS18.0統(tǒng)計軟件進行分析。結(jié)果：漢族與維吾爾族女性患者在5年無病生存期方面差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；同時漢族患者EGFR、VEGF陽性率低于維吾爾族患者（P＜0.05），并且其表達均與TNM分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)（0＜r＜1，P＜0.05）。結(jié)論：漢族女性TNBC患者EGFR、VEGF的陽性率低于維吾爾族女性患者，但兩組5年無病生存期差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），提示維吾爾族TNBC患者可能存在與漢族患者不同的影響其預(yù)后的因素，需開展進一步研究證實。

［關(guān)鍵詞］表皮生長因子受體；血管內(nèi)皮生長因子；漢族；維吾爾族；三陰性乳腺癌

1　資料和方法

1.1一般資料

收集2007年1月30日—2009年1月30日于新疆醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院住院乳腺癌患者785例，選擇其中雌激素受體（estrogen receptor，ER）、孕激素受體（progesterone receptor，PR）以及人表皮生長因子受體2（human epidermal growth factor receptor 2，HER-2）經(jīng)我院免疫組織化學(xué)染色檢測確認均為陰性的患者共167例。其中漢族患者121例，維吾爾族患者46例。納入標(biāo)準：①在本院首次接受治療的可手術(shù)的漢族、維吾爾族女性乳腺癌患者；②臨床病理資料完整；③ER、PR及HER-2表達均陰性的患者。

EGFR、VEGF確定標(biāo)準：采用PV-9000法測定EGFR、VEGF的表達，PV-9000免疫組織化學(xué)染色檢測方法是將二抗抗體分子的單價Fab段與酶聚合在一起，與一抗結(jié)合后，直接用底物進行顯色的方法。此方法有簡單、快速、敏感性強且避免了內(nèi)源性生物素所造成的背景染色的優(yōu)點。本研究中PV-9000試劑盒及鼠抗人EGFR單抗、鼠抗人VEGF單抗均購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司，一抗稀釋度均為1∶100，實驗嚴格按照質(zhì)量控制內(nèi)容進行操作，實驗步驟按照試劑盒的說明進行。用已知陽性表達的癌組織做陽性對照，PBS代替一抗作陰性對照，結(jié)果采取兩人雙盲法觀察切片。

⑴EGFR結(jié)果判讀：陰性表達為細胞或細胞膜無染色或非特異染色，分值記0分。低度陽性（+）表達為視野中有大于10%的區(qū)域呈現(xiàn)棕色或棕褐色但細胞膜染色不連續(xù)，分值為1分；中等強度（++）表達為大于10%的區(qū)域呈棕色或棕褐色且細胞膜染色連續(xù)，但形態(tài)不完整，分值為2分；強陽性（+++）表達為大于10%區(qū)域呈棕色或棕褐色，同時細胞膜染色連續(xù)且形態(tài)完整，分值為3分。而細胞輕度棕褐色染色為1分；中度棕褐色染色為2分，重度棕褐色染色為3分。

⑵VEGF結(jié)果判讀：陰性表達為細胞質(zhì)內(nèi)棕褐色染色小于25%，分值為0分；低度陽性（+）表達為25%～50%細胞質(zhì)內(nèi)呈棕褐色染色，分值為1分；中等強度（++）表達為細胞質(zhì)內(nèi)染色50%～75%，分值為2分；強陽性（+++）表達為細胞質(zhì)內(nèi)染色＞75%，細胞質(zhì)內(nèi)彌漫棕褐色染色，分值為3分。

⑶將分值相加，最后EGFR、VEGF總分值小于等于2分為陰性，大于3分為陽性。

1.2隨訪方式

采用入院復(fù)查和電話等隨訪方式，將患者術(shù)后第1次化療開始定為隨訪起始時間，觀察兩組患者治療后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移情況；發(fā)生復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移為終止事件，隨訪時間為5年，隨訪截止日期為2014年1月30日。

1.3觀察指標(biāo)

預(yù)后觀察指標(biāo)包括：兩組復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移比例和兩組5年無瘤生存期；兩組EGFR、VEGF的陽性表達率，與腫瘤分期及腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移關(guān)系。

1.4統(tǒng)計學(xué)處理

采用SPSS18.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)處理，兩組比較采用秩和檢驗和χ2檢驗；EGFR和VEGF與TNM臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)采用Spearman秩相關(guān)分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2　結(jié)　果

121例漢族TNBC患者中，復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移共30例（24.8%），而46例維吾爾族女性患者復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移共15例（32.6%，χ2=1.034，P=0.333），兩組在局部復(fù)發(fā)、遠處轉(zhuǎn)移及遠處轉(zhuǎn)移部位的對比上，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05，表1）。

兩組TNBC患者比較，漢族患者EGFR陽性表達數(shù)為52例（52/121，43%），維吾爾族為26例（26/46，56.5%），漢族患者VEGF陽性表達數(shù)為59例（59/121，48.8%），維吾爾族患者為30例（30/46，65.2%），漢族女性患者EGFR和VEGF的陽性率表達均要低于維吾爾族女性患者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05，圖1、2，表2）。

表1　漢族、維吾爾族女性TNBC復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移情況比較Tab.1　The comparison of recurrence and metastasis in Han and Uygur TNBC

圖1　EGFR陽性及陰性表達Fig.2　Positive and negative expression of EGFR

圖2　VEGF陽性及陰性表達Fig.2　Positive and negative expression of VEGF

表2　漢族、維吾爾族女性三陰性乳腺癌EGFR、VEGF表達情況比較Tab.2　The comparison of EGFR and VEGF in Han and Uygur TNBC

漢族與維吾爾族女性TNBC患者EGFR及VEGF陽性率在不同淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移分組的比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），特別是在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)大于等于4個的患者組中陽性表達率最高，其中漢族EGFR表達率為78.1%，維吾爾族為71.4%，漢族VEGF陽性表達率為84.4%，維吾爾族為85.0%；將兩組淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況與EGFR和VEGF的陽性表達率比較，結(jié)果提示，隨著淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移個數(shù)的增加，兩組EGFR和VEGF的陽性表達也逐漸增高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（0＜r＜1， P＜0.05，表3）。

漢族與維吾爾族女性TNBC各臨床分期中的EGFR和VEGF表達差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。兩組患者Ⅰ期陽性表達率均要低于Ⅱ、Ⅲ期患者，再行TNM臨床分期與EGFR及VEGF的陽性率相關(guān)性比較。結(jié)果提示，隨著TNM臨床分期的增高，兩組患者EGFR及VEGF的陽性率也隨之增高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（0＜r＜1，P＜0.05，表4）。

表3　漢族、維吾爾族女性三陰性乳腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況與EGFR、VEGF表達相關(guān)性比較Tab.3　The comparison of EGFR and VEGF with lymph node metastasis in Han and Uygur TNBC

表4　漢族、維吾爾族女性三陰性乳腺癌TNM分期與EGFR、VEGF表達情況相關(guān)性比較結(jié)果Tab.4　The comparison of EGFR and VEGF with TNM staging in Han and Uygur TNBC

3　討　論

乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展與遺傳、生理及環(huán)境因素都有關(guān)。自2000年P(guān)erou等［1］提出TNBC的概念以來，由于其預(yù)后差、進展快等特點，很快成為乳腺癌研究關(guān)注的焦點。EGFR是表皮生長因子受體家族成員之一，EGFR信號通路對細胞的增殖、分化、生長有重要調(diào)節(jié)作用。作為原癌基因C-crb編碼的跨膜蛋白，其表達于正常上皮細胞。有研究發(fā)現(xiàn)，在腫瘤的進展過程中，EGFR的異常表達和活化與腫瘤血管生成、侵襲、轉(zhuǎn)移等一系列生物學(xué)行為密切相關(guān)［2］。針對其分子靶向治療的代表性藥物是吉非替尼（gefitinib），主要作用于EGFR細胞內(nèi)的酪氨酸激酶，與ATP競爭并抑制其功能。Nielsen等［3］報道的EGFR在TNBC的表達率為45%～70%。本研究中EGFR陽性表達總數(shù)為78例（46.7%），與國外報道基本一致。本研究發(fā)現(xiàn)，EGFR陽性表達在漢族女性組（42.9%）明顯低于維吾爾族女性組（57%），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。

VEGF是一種血管生成調(diào)控因子，它可與血管內(nèi)皮細胞發(fā)生特異性結(jié)合，并刺激血管內(nèi)皮細胞增殖，促進腫瘤新生血管形成，為腫瘤細胞的轉(zhuǎn)移提供基礎(chǔ)，與腫瘤生長關(guān)系密切［4］。研究顯示，VEGF在TNBC中的陽性表達率明顯高于非三陰性乳腺癌（non-triple-negative breast cancer，NTNBC），并且與其5年生存率顯著相關(guān)，VEGF高表達提示預(yù)后較差［5-6］。研究顯示，鑒于VEGF的特性，其有可能成為TNBC治療的新靶點［7］。目前臨床上針對VEGF靶向治療的藥物主要有兩種，一種是抗血管內(nèi)皮細胞生長因子的貝伐單抗，另一種是血管內(nèi)皮抑素，代表藥物是恩度。

本研究結(jié)果顯示，漢族、維吾爾族女性TNBC中VEGF陽性表達率為53.3%（89/167），與楊艷芳等［8］的研究報道（45.0%）相近。但兩組比較，漢族TNBC患者陽性率為48.8%，維吾爾族患者為65.2%，漢族組明顯低于維吾爾族組（P=0.022）。同時，EGFR的表達漢族患者也低于維吾爾族患者，分析產(chǎn)生此種差異的原因，可能是因為維吾爾族TNBC患者就診時腫瘤分期較晚有關(guān)。

本研究隨訪結(jié)果顯示，漢族TNBC患者5年內(nèi)發(fā)生復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移人數(shù)為30例（24.8%），而維吾爾族患者發(fā)生復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移人數(shù)為15例（32.6%），差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。在兩組患者5年無瘤生存無明顯差異的情況下，我們進一步討論EGFR、VEGF與腫瘤臨床分期及淋巴轉(zhuǎn)移情況的關(guān)系。

EGFR、VEGF在TNBC中過表達，與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤分期有一定相關(guān)性，EGFR及VEGF過度表達的患者，容易早期復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移，通常預(yù)后較差［9］。但也有不同結(jié)論者，Jobim等［10］的研究結(jié)果顯示，乳腺癌患者的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤大小及組織學(xué)分級與VEGF的陽性表達并無關(guān)系。本研究結(jié)果顯示，EGFR、VEGF陽性表達率與漢族、維吾爾族TNBC患者的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)量及TNM分期呈正相關(guān)（0＜r＜1，P＜0.05）。EGFR、VEGF陽性表達隨著淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)目增加及TNM分期的增高而逐漸升高，說明EGFR、VEGF在TNBC的進展過程中起到了一定作用。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和TNM分期是臨床判斷預(yù)后的重要依據(jù)，而兩者也是制定個體化綜合治療方案的重要參考依據(jù)，EGFR及VEGF與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況和TNM分期的相關(guān)性也進一步提示：我們應(yīng)高度重視不同民族TNBC患者中EGFR、VEGF的表達差異。作為TNBC分子靶向治療的突破口及新靶點，其臨床意義重大。我們應(yīng)針對不同民族患者的TNBC生物學(xué)特征，采取不同的個體化治療策略，以進一步獲得更高的治愈率及生存率。

綜上所述，本研究漢族與維吾爾族女性TNBC5年無病生存期差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），但EGFR及VEGF陽性率表達差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。此外，兩組在EGFR、VEGF陽性表達均與TNM臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)呈正相關(guān)（0＜r＜1，P＜0.05）。有研究表明，EGFR和VEGF作為TNBC的獨立預(yù)后因素，當(dāng)它們在乳腺癌患者中高表達時，往往提示預(yù)后較差［11］。本研究中經(jīng)過統(tǒng)計分析發(fā)現(xiàn)，無論是EGFR，還是VEGF，漢族TNBC患者的陽性表達率都要低于維吾爾族患者，但兩者的5年無病生存率以及復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移情況都沒有明顯差別，因此，我們認為，維吾爾族女性TNBC患者可能存在與漢族女性患者不同的影響其預(yù)后的因素，需開展進一步研究證實。

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DOI：10.3969/j.issn.1007-3969.2016.05.009

中圖分類號：R737.9

文獻標(biāo)志碼：A

文章編號：1007-3639（2016）05-0404-05

收稿日期：（2015-05-19修回日期：2016-02-22）

基金項目：國家自然科學(xué)基金（81260390）；新疆維吾爾自治區(qū)科技廳科技支疆項目（2013911116）。通信作者：歐江華E-mail：oujianghua@hotmail.com

The differences in expressions of EGFR and VEGF between Han and Uygur triple-negative breast cancer patients

JIANG Weihua， LI Yongtao， WANG Xiaowen， ZHANG Mingshuai， ZHANG Chenguang，YI Lina， OU Jianghua
（Ward 2， Department of Breast Surgery， Tumor Hospital， Xinjiang Medical University， Urumqi 830011， Xinjiang Uygur Autonomous Region， China）Correspondence to： OU Jianghua E-mail： oujianghua@hotmail.com

［Abstract］Background and purpose： Triple-negative breast cancer （TNBC） is currently the focus of breast cancer research. Researches demonstrated that the molecular biological characteristics of different ethnic groups are not the same. This study mainly probed into the expression of endothelial growth factor receptor （EGFR） and vascular endothelial growth factor （VEGF） in Han and Uygur TNBC patients， and the relationship between the expression and prognosis of patients. Methods： From Jan. 2007 to Jan. 2009， 167 patients were admitted. Among those， 121 were Han and 46 were Uygur patients. The expressions of EGFR， and VEGF were detected by PV-9000 immunohistochemical staining， and compared with lymph node metastasis and clinical staging. The results were analyzed by SPSS 18.0 statistical software. Results： Five-year disease-free survival （DFS） of two groups had no indifferent （P＞0.05）. EGFR and VEGF positive rate of Han patients was lower than that of Uygur patients （P＜0.05）. Their expressions were correlated with TNM staging and lymph node metastasis （0＜r＜1， P＜0.05）. Conclusion： This study found that the EGFR and VEGF expression rate which was unfavorable to prognosis of TNBC patients was lower in the Uygur group than that in the Han group. However， no significant difference in 5-year DFS was found between the two groups （P＞0.05）. Uygur TNBC patients might have a different prognostic factor as compared with Han patients. Further studies need to be carried out.

［Key words］Endothelial growth factor receptor； Vascular endothelial growth factor； Han； Uygur；Triple-negative breast cancer三陰性乳腺癌（triple-negative breast cancer，TNBC）是目前乳腺癌研究關(guān)注的焦點。近幾年，對不同民族間TNBC的差異問題日益受到重視。本文通過分析漢族、維吾爾族女性TNBC患者表皮生長因子受體（epidermal growth factor receptor，EGFR）及血管內(nèi)皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）的陽性表達是否存在差異，并探討其與預(yù)后間的關(guān)系，為求證不同民族TNBC患者的生物學(xué)特征提供線索，同時也為進一步了解影響TNBC患者的預(yù)后因素提供一定的依據(jù)。