聯合檢測RF、AKA、抗CCP抗體和CRP對RA的診斷價值

王　波,牛莉莉,常　波

(1.大連市中心醫院 檢驗科，遼寧 大連116001；2.大連醫科大學 檢驗醫學院醫學檢驗2010級；

3.大連市兒童醫院)

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聯合檢測RF、AKA、抗CCP抗體和CRP對RA的診斷價值

王波1*,牛莉莉2,常波3

(1.大連市中心醫院 檢驗科，遼寧 大連116001；2.大連醫科大學 檢驗醫學院醫學檢驗2010級；

3.大連市兒童醫院)

摘要：目的探討聯合檢測類風濕因子(RF)、抗角蛋白抗體(AKA) 、抗環瓜氨酸多肽(CCP)抗體和C反應蛋白(CRP)在類風濕性關節炎(RA)診斷中的價值。方法收集68例RA病人和42例非RA的自身免疫病病人血清，化學發光微粒子免疫法測抗CCP抗體，間接免疫熒光法檢測AKA，免疫比濁法測RF和CRP，然后對檢測結果進行計算分析。結果RA組RF、AKA、抗CCP抗體和CRP的陽性率均明顯高于非RA組，且差異具有統計學意義(P<0.01或P<0.05)。單項檢測RA診斷的敏感性由高到低排序是CRP、抗CCP抗體、RF、AKA，特異性由高到低排序為AKA、抗CCP抗體、RF、CRP，四者串聯聯合檢測提高了RA診斷的敏感性(91.2%)，并聯聯合檢測提高了特異性,甚至達到100%。結論RF、AKA、抗CCP抗體、CRP單獨檢測RA都具有一定的靈敏度和特異性，但單獨應用一項指標容易造成漏診或誤診。聯合檢測四項指標可極大提高特異性和敏感度，有利于提高RA患者的早期診斷。

關鍵詞：類風濕性關節炎; 抗環瓜氨酸肽抗體; 抗角蛋白抗體; C反應蛋白

(ChinJLabDiagn,2016,20:0425)

類風濕性關節炎(RA)是以關節及周圍組織受累為主要表現的全身性疾病，是臨床上常見的自身免疫性疾病之一。如診療不及時，病情會在短時間內逐漸加重，出現軟骨和骨的破壞與侵蝕，關節畸形，從而失去勞動能力，具有很高的致殘率[1]。早期進行診斷和干預治療可有效減少RA致殘率。目前臨床上主要通過臨床表現、X線影像學檢查、類風濕因子(RF)等血清學抗體檢查等來確診RA，其中自身抗體等血清學檢測指標在早期診斷中占據重要地位，其敏感性和特異性對RA確診意義重大[2]。在RA診斷中，傳統血清學指標，如RF、C反應蛋白(CRP)具有敏感性高而特異性不高的特點，不利于臨床早期的診斷。隨著科研水平的提高和技術的發展，一些抗體如抗環瓜氨酸多肽抗體(抗CCP抗體)、抗角蛋白抗體(AKA)等對RA的高特異性獲得了許多研究人員的認可[3]。本研究通過對RF、抗CCP抗體、AKA、CRP的測定來探討其各自以及四者串聯、并聯聯合檢測對RA的診斷價值。

1材料與方法

1.1標本來源

研究標本均來源于大連中心醫院2015年1月至2015年3月住院的患者。實驗組均為RA患者，共68例(其中20例RF陰性)。所有患者診斷標準均符合美國風濕病協會(ACR) 和歐洲抗風濕病聯盟(EULAR)2010年的RA分類標準[4]。其中女49例，男19例，年齡31-81歲。其他自身免疫組42例，包括骨關節炎13例，系統性紅斑狼瘡(SLE)8例，強直性脊柱炎6例，干燥綜合征4例，痛風2例，系統性硬化癥1例，其他免疫性疾病8例，以上病例均符合相應的診斷標準，其中女24例，男18例，年齡23-79歲。

1.2主要試劑

抗環瓜氨酸多肽抗體試劑盒(美國雅培公司),抗角蛋白抗體檢測試劑盒(北京和杰創新生物技術有限公司)，類風濕因子檢測試劑盒(美國貝克曼庫爾特有限公司)，C反應蛋白檢測試劑盒(美國貝克曼庫爾特有限公司)。

1.3主要儀器及耗材

熒光顯微鏡(德國蔡司公司EUROStarⅡ),ARCHITECT i 2000SR全自動化學發光儀(美國雅培公司),IMMAGE 800特定蛋白儀(美國貝克曼庫爾特有限公司)，離心機(北京時代北利離心機有限公司)，移液槍(芬蘭Dragonmed移液槍，量程20 μl-200 μl)。

1.4檢測方法

1.4.1標本采集所有患者均于清晨抽取空腹靜脈血5 ml，待血液凝固后3 000轉/分鐘離心6 min，分離血清后確保所有標本均無溶血，-20℃保存待檢。所有操作均嚴格按照試劑說明書進行。

1.4.2抗CCP抗體測定利用化學發光微粒子免疫法的原理，檢測結果大于5 U/ml為陽性。

1.4.3AKA檢測采用間接免疫熒光法檢測，檢測結果在熒光顯微鏡下觀察，見到角質層出現明顯的多條板層狀(連續)或者點片狀(不連續)的熒光即為陽性結果。

1.4.4RF和CRP的檢測利用雙光徑免疫比濁法的原理，試劑均采用與儀器配套的國際標準試劑。檢測結果RF>30I U/ml為陽性，CRP>0.5 mg/dl為陽性。

1.5數據處理

收集的數據采用SPSS17.0軟件進行統計學分析。計數資料采用χ2檢驗，P<0.05或P<0.01為差異有統計學意義。

2結果

2.1RF、AKA、抗CCP抗體、CRP在RA組和非RA組陽性率的比較

RA組RF、AKA、抗CCP抗體、CRP的陽性率分別為70.6%、66.1%、79.4%、80.9%。非RA組RF、AKA、抗CCP抗體、CRP的陽性率分別為21.4%、7.1%、9.5%、61.9%。RA組RF、AKA、抗CCP抗體、CRP陽性率明顯高于非RA組，兩者之間存在顯著差異(P<0.01或P<0.05)，其中在RA組以CRP陽性率最高，AKA陽性率最低。

此外，在20例RF陰性的RA患者中，AKA、抗CCP抗體、CRP的陽性率分別為45%、75%、80%，可以看出這三項指標對RF陰性的RA患者檢測的也有較高的陽性檢出率。

表1　兩組RF、AKA、抗CCP抗體、CRP在各組中陽性

2.2RF、AKA、抗CCP抗體、CRP敏感性、特異性的比較分析

經過計算，在四項檢測指標中，敏感性由高到低排序是CRP、抗CCP抗體、RF、AKA，分別為80.9%、79.4%、70.6%、66.1%，特異性由高到低排序為AKA、抗CCP抗體、RF、CRP，分別為92.9%、90.4%、78.6%、38.1%。

表2　RF、AKA、抗CCP抗體、CRP敏感性和特異性(%)

2.3RF、AKA、抗CCP抗體、CRP四者串聯、并聯檢測的敏感性、特異性的比較分析

相較于RF、AKA、抗CCP抗體、CRP單項指標檢測RA，四項指標串聯檢測RA，使特異性大大提高，甚至達到100%。而四項指標并聯聯合檢測則使敏感性提高，達到了91.2%。

表3　四項指標串、并聯聯合檢測的敏感性和

注：*串聯聯合檢測，#并聯聯合檢測

3討論

類風濕關節炎是臨床上常見的自身免疫性疾病，在其發病早期即可以出現關節破壞,如果沒有得到及時有效的診斷，錯過了最佳的治療時間，大多數患者在兩三年之內就會出現關節的不可逆轉性破壞，進而發展為關節畸形和功能障礙,嚴重影響患者的身心健康。我國目前主要根據臨床特征、X線影像學檢查以及RF等自身抗體來確診RA。而自身抗體在RA的發生、發展過程中也發揮著重要的作用，由于其檢查具有便捷，快速，容易操作等優點，因此在臨床診斷RA中得到廣泛應用。隨著人們對RA的不斷探索和臨床診斷方法的進步，而且 RA的發病率不斷增長，所以在RA的發病早期及時采取治療措施干預，以便及時控制病情的進展是減輕RA關節損害的關鍵措施[5,6]。

由于在系統性紅斑狼瘡、強者性脊柱炎等其它自身免疫疾病患者甚至正常人血清中均可檢測到RF[7]，因此單一檢測RF容易造成臨床上的誤診或漏診，故一般需要結合其它指標與RF聯合檢測以確診RA。Bas[8]等研究發現，RF與RA患者的臨床表現和骨侵蝕性的損害程度相關，因此在了解疾病的發展狀況方面具有重要價值。尋找RA的高特異性抗體成為科研的熱門方向。近年來,臨床通過檢測血清抗CCP抗體來輔助RA的診斷,諸多研究證實了其具有較高的特異性[9]，而且在RA發病早期即可檢出。在2010年美國風濕病學會(American College of Rheumatology,ACR)與歐洲抗風濕病聯盟(European League Against Rheumatism，EULAR)共同推出的RA診斷標準中，抗CCP抗體被定為RA診斷的血清學標志性抗體，可見這一指標在RA的早期診斷中有重要價值。本項研究中，抗CCP抗體的特異性經計算為90.4%，RF為78.6%，可見抗CCP抗體的特異性略高于RF。有報道指出，此抗體有助于早期RA及RF陰性患者的確診，并可用于區分RA及其他RF陰性RA的診斷，并可用于區分RA及RF陽性骨關節炎癥[10]。

AKA是在RA患者血清中發現一種能與鼠食管中上段角質層反應的IgG抗體。AKA具有很高的特異性，在疾病早期即可檢出，且抗體與疾病嚴重程度和活動性有一定的相關性[11]。AKA與RA病情嚴重性和功能障礙有關，其檢測RA的敏感性40%-70%[12]。在本項研究中AKA的敏感度為66.1%，與研究報道相符。其特異性為92.9%，在四項檢測指標中特異性最高。但是由于AKA敏感性低，故一般只能作為臨床上診斷RA的輔助指標。

CRP是第一個被認識的急性時相反應蛋白，也是目前臨床上使用最廣的炎癥標志物之一，是判斷機體炎癥的極其靈敏的指標。彭宇生等[13]研究證明CRP在類風濕關節炎病情進展過程中起著重要作用，能夠作為類風濕關節炎診斷和預后治療的一個參考指標，且其升高與類風濕關節炎的活動呈正相關。在本項研究中，RA患者血清中的CRP在四項研究指標中敏感性最高(80.9%)，說明對于部分RF陰性的RA患者，是可以通過檢測CRP來避免漏診。但因其特異性太低(38.1%)，容易引起臨床誤診，故在臨床上常常只作為輔助診斷指標，用以和其它檢測指標聯合提高診斷的準確度。

本項研究中，RF、AKA、抗CCP抗體、CRP在RA組的陽性率均高于非RA組，且差異具有統計學意義(P<0.01或P<0.05)，說明四項指標均可以作為RA的輔助診斷指標。但四項指標雖然都有其各自的優勢，可是由于每項檢測指標單獨應用于RA診斷的時候都會存在一定的局限性，故不能同時滿足高敏感性和高特異性。而聯合檢測RF、AKA、抗CCP抗體、CRP可彌補單項指標診斷RA的不足，極大提高RA診斷的敏感性或特異性。如在本研究中，CRP和AKA、RF及抗CCP抗體串聯聯合檢測特異性達到了100%，并聯聯合檢測的敏感性達到了91.2%。因此聯合檢測這四項指標能有效減少漏診率和誤診率，具有較高的臨床應用價值，有利于提高早期的診斷率，使患者能夠得到及時有效的治療，對于及時控制患者病情和改善預后有重要的意義。

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The role of combined application of RF,AKA,anti-CCP antibody and CRP in diagnosing rheumatoid arthritis

WANGBo,NIULi-li,CHANGBo.

(DepartmentofClinicalLaboratory,DalianMunicipalCenteralHospital,DalianLiaoning116001,China)

Abstract:ObjectiveTo explore the clinical value of combination detection of rheumatoid factor(RF),anti-cyclic citrullinated peptide antibody (CCP),anti-keratin antibody(AKA) and c-reactive protein (CRP)in the diagnosing rheumatoid arthritis(RA).MethodsThe serum samples of 68 RA patients and 42 other autoimmune diseases patients were collected.Anti-CCP antibody was detected by chemiluminescent microparticle immunoassay(CMIA).AKA was measured by indirect immunofluorescence.Both RF and CRP were detected by Immune turbidimetry (ITM).Then analyze the results.ResultsIn RA group,positive rate of RF,Anti-CCP antibody,AKA,CRP was obviously higher than those of other autoimmune diseases patients(P<0.01 or P<0.05),the difference between both groups was statistically significant.Single diagnostic sensitivity of RA from high to low ranking is CRP Anti-CCP antibody RF AKA.The diagnostic specificity of RA from high to low ranking is AKA Anti-CCP antibody RF CRP.Four series of joint detection improves the sensitivity(91.2%) of RA diagnosis,parallel combined detection can improve the specificity and even reached 100%.ConclusionThe RF,AKA,Anti-CCP antibody and CRP detection alone RA has good sensitivity and specificity,but a separate application index easily missed diagnosis or misdiagnosis.Combined detection of four indexes may offer clinical benefits for diagnosis of RA and can significantly improve the specificity and sensitivity to diagnose RA.

Key words:Rheumatoid arthritis;Anti-cyclic citrullinated peptide;anti-keratin antibody;c-reactive protein

(收稿日期：2015-07-07)

作者簡介：王波(1969- )，男，碩士，主任技師，研究方向：臨床免疫學。

文獻標識碼：A

中圖分類號：R593.22

文章編號：1007-4287(2016)03-0425-04

*通訊作者