齊墩果酸對抗小鼠胰島細胞糖脂毒性和凋亡促進胰島素分泌

張?之，程路峰，張東輝，張 燕，毛新民，李學(xué)軍

(1.新疆醫(yī)科大學(xué)?基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院藥理教研室;2.新疆醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)學(xué)院;3.蘭州軍區(qū)烏魯木齊總醫(yī)院，新疆烏魯木齊830011;4.北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部，北京100191)

齊墩果酸(Oleanolic acid，OA)是一種五環(huán)三萜類化合物，臨床上用為保肝藥，是女貞子、石榴等許多中藥的活性成分之一。近年來研究發(fā)現(xiàn)OA具有改善糖耐量、保護糖尿病腎臟、激動PPARγ，激活酪氨酸磷酸酶Shp2等作用，可能是一個有潛力的抗糖尿病的天然物質(zhì)［1-5］，齊墩果酸降糖作用可能與其能促進胰島素分泌有關(guān)［6］。但對其在長期糖脂毒狀態(tài)下對胰島細胞的作用未見報道。本實驗觀察了OA在高糖脂毒環(huán)境下對原代培養(yǎng)胰島細胞分泌功能的影響，并從其對胰島細胞增殖與凋亡的影響探討其可能的機制。

1 材料與方法

1.1 藥品與試劑

齊墩果酸、雙硫棕、臺盼藍、噻唑藍(MTT)和胰蛋白酶(Sigma公司);Annexin-FITC/PI雙染試劑盒(Invetrogene公司);胰島素放射免疫分析試劑盒(北京北方生物技術(shù)研究所);DMEM完全培養(yǎng)液和胎牛血清(Gibco公司);格列苯脲(Glibenclamide，天津太平洋制藥公司)，棕櫚酸(palmitic acid，PA)，碘乙酸均為CP級。

1.2 小鼠原代胰島細胞培養(yǎng)

參照參考文獻［7］等方法，經(jīng)形態(tài)學(xué)鑒定、活力及生物學(xué)功能鑒定合格后，備用。

1.3 胰島素分泌功能測定

將胰島細胞數(shù)調(diào)整為2×105～5×105個/mL，每孔加胰島細胞懸液1.0 mL，接種于24孔培養(yǎng)板中，分別加入低糖(5.6 mmol/L葡萄糖)，高糖脂(30 mmol/L葡萄糖+0.5 mmol/L棕櫚酸)，高糖脂+陽性對照格列苯脲(25 mg/L)，高糖脂+不同濃度OA(5、10和20 mg/L)進行培養(yǎng)，每組4復(fù)孔，2和5 d后吸取培養(yǎng)液上清，用放射免疫法測定胰島素含量。

1.4 胰島……

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