初發性類風濕關節炎患者外周血中Tfh細胞及其相關細胞因子的臨床意義

徐 琦，程路峰，孟 巖，付 偉，楊 昭，丁劍冰*，羅 莉*

(新疆醫科大學1.基礎醫學院;2.公共衛生與預防醫學博士后流動站;3.第一附屬醫院風濕科，新疆烏魯木齊830011)

濾泡輔助性T細胞(T follicular helper cells，Tfh細胞)是近年來新發現的，真正意義上輔助B細胞功能的T細胞亞群，其輔助B細胞活化、增殖、分化和分泌免疫球蛋白［1］。在類風濕性關節炎(rheumatoid arthritis，RA)中，B細胞分泌大量高親和力抗體可誘發炎性反應，致關節損傷［2］。本實驗擬通過對RA患者外周血Tfh細胞表型及相關細胞因子的檢測，探討其與初發性RA發病的關系。

1 材料與方法

1.1 研究對象及主要試劑

1.1.1 研究對象:RA組:新疆醫科大學第一附屬醫院風濕科初次就診患者，符合1987年美國風濕病學會(ACR)RA診斷標準。對照組:為健康志愿者。各組均簽署知情同意書。

1.1.2 主要試劑:FITC標記的抗CXCR5，CD3抗體;PE標記的抗CD8、CD3抗體;PerCP標記的抗CD4抗體、PE-cy7標記的抗 ICOS抗體以及同型對照(Becton Dickinson公司)。ELISA試劑盒(R＆D公司)。

1.2 免疫熒光標記和流式細胞術檢測:抗凝外周血100 μL，分別加入FITC標記的抗CXCR5，PE標記的抗CD3，PerCP標記的抗CD4，PE-cy7標記的抗 ICOS抗體各20 μL或者 FITC標記的CD3，PE標記的 CD8和PerCP標記的 CD4抗體各20 μL，按規程操作。分析Th/Tc細胞，先以CD3+細胞設門分群后，分析CD4+、CD8+細胞百分率(圖1)。Tfh細胞分析，以FSC/SSC設門，得到CD3+CD4+細胞，進而分析ICOS和CXCR5的表達(圖2)。

1.3 血清學指標檢測:按照ELISA試劑盒操作步驟檢測，酶標儀檢測450 nm處的吸光度(A)值。

1.4 統計學分析:數據采用SPSS14.0統計軟件處理。數據以均數±標準差(±s)表示，根據方差齊性檢驗結果，兩組間比較采用獨立樣本t檢驗，不同指標之間進行Spearman相關分析。

2 結果

2.1 RA組和對照組Th/Tc細胞、CD3+CD4+CXCR5+ICOS+T細胞百分率比較:RA組CD3+CD4+T細胞百分率與對照組無顯著性差異，但 RA組 Th/Tc的比值低于對照組(P＜0.05)。……