超聲輻照微泡對肝細胞生長因子轉染大鼠損傷面神經的促進作用

郝亞寧，駱文龍

(重慶醫科大學附屬第二醫院耳鼻咽喉頭頸外科，重慶400010)

面神經作為一條重要的周圍神經，主要功能是支配面部肌肉的運動。外傷、鄰近組織感染、腦血管意外及醫源性損傷都可能損傷面神經。近幾年諸多學者對面神經損傷的修復進行了系統研究。由于基因治療能在分子水平上糾正疾病的發病過程，因此在面神經損傷的防治上有較好的應用前景。肝細胞生長因子(hepatocyte growth factor，HGF)對感覺神經［1］、副交感［2］及交感神經［3－4］，特別是對運動神經［5－6］的發育、軸索生長都有一定的神經營養性作用和導向作用。超聲輻照微泡能將目的基因轉入各種靶細胞和靶組織，但它在面神經損傷修復的作用研究，尚未見國內外報道。因此本實驗運用超聲微泡介導HGF基因轉染損傷后的面神經，觀察HGF的表達及受損面神經傳導速度、神經電位波幅、潛伏期等參數，探討該方法的有效性，為面神經損傷的修復提供一種新型、高效、安全的方法。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

清潔級SD大鼠，40只，雌雄不限，體質量200～250g，由重慶醫科大學動物實驗中心提供，合格證號:SCXK(渝)2007-0001。

1.2 質粒的提取

HGF菌液由重慶醫科大學附屬二院肝病研究治療中心提供，HGF經大腸埃希氏菌擴增16 h后，按質粒大量抽提試劑盒 (Omega公司)說明提取。提取純化的HGF經酶切電泳鑒定，紫外分光光度計測定其濃度為1 g/L。

1.3 試劑

Trizol試劑，兔抗鼠HGF多克隆抗體和兔抗鼠β-actin多克隆抗體，羊抗兔IgG，化學發光試劑，(武漢谷歌生物科技有限公司);脂質微泡，(重醫附二院超聲影像學研究所提供)白色凍干粉末狀。……