登革病毒4型E蛋白的表達(dá)與多克隆抗體的制備

李竹石，林 華，楊 健，楊會(huì)強(qiáng)，曾獻(xiàn)武，趙 宇，劉 俐，劉莉娜，康 莊，俞永新，李玉華*

(1.中國生物技術(shù)集團(tuán)公司成都生物制品研究所有限責(zé)任公司，四川成都610023;2.中國食品藥品檢定研究院，北京100050)

登革病毒(Dengue virus，DENV)屬于黃病毒科黃病毒屬，分為1、2、3和4這4個(gè)不同的血清型，是一類經(jīng)蚊媒傳播的單股正鏈RNA病毒。登革病毒可引起登革熱(Dengue fever，DF)及更嚴(yán)重的登革出血熱(Dengue hemorrhagic fever，DHF)與登革休克綜合征(Dengue shock syndrome，DSS)，目前尚無特異性藥物與疫苗問世，因此已成為全球尤其是熱帶與亞熱帶地區(qū)人群健康的主要威脅之一。根據(jù)WHO發(fā)布的信息，全球每年約有1億登革熱患者，死亡達(dá)2.5萬人。近年來，登革熱在我國的發(fā)病率亦呈顯著上升趨勢［1－3］。

登革病毒基因組編碼3個(gè)結(jié)構(gòu)蛋白(C、prM、E)和7 個(gè)非結(jié)構(gòu)蛋白(NS1、NS2a、NS2b、NS3、NS4a、NS4b和NS5)。其中，結(jié)構(gòu)蛋白E包括3個(gè)結(jié)構(gòu)域:I區(qū)、II區(qū)和III區(qū)，其中III區(qū)含有IgG免疫球蛋白樣折疊，并通過二硫鍵穩(wěn)定自身結(jié)構(gòu)，是登革病毒與宿主細(xì)胞結(jié)合的主要位點(diǎn)，也是誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生保護(hù)性中和抗體和血凝抑制抗體的主要部位［4－9］。本研究分別將去除C端跨膜區(qū)的登革病毒4型E蛋白(DENV4E，402AA)以及 E 蛋白 III區(qū)(DENV4EIII，126AA)克隆到pET-32a(+)質(zhì)粒中，構(gòu)建兩種蛋白的表達(dá)載體，并利用 IPTG分別誘導(dǎo) DENV4E與DENV4EIII蛋白在原核細(xì)胞中大量表達(dá)，以表達(dá)的蛋白免疫家兔并采集血清，分別制備出針對DENV4E與DENV4EIII蛋白的多克隆抗體，并對其進(jìn)行鑒定，從而為進(jìn)一步的研究提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

Rosetta感受態(tài)細(xì)胞和pET-32a(+)質(zhì)粒(成都生物制品研究所有限責(zé)任公司病毒疫苗研究室保存);TOP10感受態(tài)細(xì)胞(北京天根公司);含有登革……