NF-κB和AP-1在膠原性關節炎小鼠滑膜組織中的表達及活性升高

羅心靜，莫選榮，周玲玲

(臺州學院醫學院生理學教研室，浙江臺州318000)

類風濕關節炎(rheumatoid arthritis，RA)是一種以累及周圍關節為主要表現的系統性自身免疫病。炎性細胞因子過度表達是導致RA滑膜炎癥和骨質破壞的重要因素。而在炎性介質的表達調節中，核轉錄因子Kappa B(nuclear factor κB，NF-κB)和激活蛋白 1(activator protein-1，AP-1)被認為是最重要的轉錄調控分子，它們的表達和活性增加可促進炎性細胞因子的生成［1－2］。本研究觀察了膠原性關節炎(collagen-induced arthritis，CIA)小鼠滑膜中 NF-κB 和 AP-1表達及活性變化，以探討RA病變的機制。

1 材料與方法

1.1 動物:清潔級雄性DBA/1小鼠20只，年齡8～10周(上海實驗動物中心)，正常飼養。

1.2 試劑:牛II型膠原(Chondrex公司);完全福氏佐劑(CFA)或不完全福氏佐劑(FIA)(Sigma公司);TNF-α和IL-6酶聯免疫吸附測定(ELISA)試劑盒(博士德公司);抗AP-1(fos)抗體和抗NF-κB(P65)抗體(Cell signal公司);電泳遷移率分析(EMSA)試劑盒(Pierce公司);AP-1寡核苷酸探針(5'-CGCTTGATGACTCAGCCGGAA-3')、NF-κB 寡核苷酸探針(5'-AGTTGA GGGGACTTTCCCAGGC-3')由上海英俊公司合成。

1.3 分組和造模:將小鼠隨機分成正常對照組和CIA模型實驗組。CIA模型制備參照文獻［3］。初次免疫30 d后處死小鼠，心臟取血，分離血清，并取左后足跖趾關節連續冰凍切片。

1.4 細胞因子檢測:小鼠血清中 TNF-α、IL-6的含量用ELISA法檢測，具體操作按ELISA試劑盒說明書進行。

1.5 免疫組化法檢測NF-κB和AP-1表達:石蠟切片脫蠟水化;蒸餾水沖洗后于3%H2O2孵育10 min，PBS洗后微波法修復抗原，滴加封閉血清，室溫孵育20 min;滴加適當稀釋抗NF-KB(P65)或抗AP-1(fos)抗體，37℃孵育2 h;PBS沖洗后滴加生物素標記的二抗，37℃孵育15 min;PBS沖洗后滴加辣根酶標記的鏈霉卵白素工作液，37℃孵育15 min;PBS沖洗后滴加DBA顯色。沖洗后蘇木素復染，中性樹膠封片。圖片分析儀進行圖片分析，測定平均吸光度值。……