乳腺癌彩色多普勒超聲表現與P53、Ki-67及p63表達的相關性及意義

蒿業紅，蔣天安

（1.浙江蕭山醫院超聲科，浙江 杭州 311201；2.浙江大學醫學院第一附屬醫院超聲科，浙江 杭州 310003）

相對于歐美等國家來說，我國雖然是乳腺癌低發國家，但是近年來，乳腺癌的發病率正逐年上升，成為近年危害女性健康最常見惡性腫瘤之一，其預后和評估對臨床治療有著重要的指導意義。彩色多普勒超聲檢查能夠簡便而有效地對乳腺癌進行初步診斷。隨著分子生物學的迅速發展，人們發現乳腺癌的發生、轉移和預后與多種基因蛋白的突變及異常表達有密切關系。本組病例中，116例乳腺癌患者術前均進行彩色多普勒超聲檢查，手術后腫瘤標本應用免疫組化二步法測定P53、Ki-67及p63，二者進行比較分析，探討這三個基因蛋白的表達與乳腺癌腫塊彩色多普勒超聲表現之間的關系和意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本院2009年4月～2010年7月間住院的116例女性乳腺癌初診患者，平均年齡52.3歲（38～65歲），其診斷均經術后病理組織學檢查證實，全部患者手術前均無放、化療及激素治療史，所有病例手術治療前均經高頻彩色多普勒超聲檢查，觀察腫塊大小及其與周邊組織關系，之后采用Adler分級法觀察腫塊內部血供情況，同時觀察雙側腋窩淋巴結是否腫大。術后對腫瘤標本進行P53、Ki-67及p63等免疫組化指標測定。

1.2 儀器與方法

應用西門子公司Sequioa512彩色多普勒超聲診斷儀，探頭頻率8～10MHz。檢查時患者仰臥，充分暴露乳房，使用線陣高頻探頭，經體表直接檢查，以乳頭為中心，自乳房12點鐘處，從乳房邊緣向乳頭方向順時針360度輪輻狀掃查，檢查時各切面相互部分重疊覆蓋，無盲區，然后檢查乳房中央區。發現腫塊時記錄腫塊大小、形態、內部回聲結構、邊界是否清晰（即是否侵犯周邊組織）及周邊0.5cm范圍內血流分布情況。彩色血流豐富程度按Adler血流分級法，將所有病人分為2組，一組為0～1級血流，另一組為2～3級血流，測量其收縮期峰值和阻力指數。最后檢查雙側腋窩，觀察有無腫大淋巴結及其形態改變、血供情況。

術后對腫瘤標本進行P53、Ki-67及p63指標免疫組化二步法測定，所有標本均為手術切除24小時內取材，經4%甲醛溶液固定，常規石蠟包埋，4μm連續厚切片。操作步驟方法按免疫組化試劑盒說明進行，試劑盒均購自基因公司。

1.3 統計學處理

把全部數據輸入SPSS13.0統計軟件包進行數據處理，采用卡方檢驗。

2 結果

116例乳腺癌彩色多普勒超聲表現，腫塊直徑<2cm 40例（34.48%），腫塊直徑≥2cm 76例（65.52%）。腫塊彩色多普勒血流分級 0～1級 22例（18.97%），2～3級 94例（81.03%），腫塊侵犯周邊組織34例 （29.31%）腋窩淋巴結轉移57例（49.14%）。

116例乳腺癌中，P53表達陽性67例（57.8%），Ki-67陽性 82例（70.7%），p63陽性 7例（6.0%）。

圖1 患者左乳內上象限見約2.5cm×2.0cm低回聲塊，形態不規則，邊界不清，內部回聲強弱不均，CDFI示腫塊內可見幾條粗大血管，Adler分級為2級，測RI=0.76。Figure 1. The tumor was in upper inner quadrant of left breast,with irregular shape,obscure boundary,asymmetrical echo inside,a few blood vessels by CDFI,Adler Grade 2,and RI=0.76.

通過彩色多普勒超聲表現和免疫組化結果分析比較（見表1）可以發現腫瘤直徑≥2cm、血流顯像分級2～3級、淋巴結轉移陽性和侵犯周邊組織者其P53、ki-67陽性表達率分別高于腫瘤直徑<2cm、血流顯像分級0～1級、無淋巴結轉移和無侵犯周邊組織者，且差異具有顯著性（P≤0.05）。p63陽性的表達卻恰恰相反，腫瘤直徑≥2cm、血流顯像分級2～3級、淋巴結轉移陽性和侵犯周邊組織者其p63陽性率分別低于腫瘤直徑<2cm，血流顯像分級0～1級無淋巴結轉移和無侵犯周邊組織者，差異有顯著性（P<0.05）。

表1 116例乳腺癌彩色多普勒超聲表現和免疫組化結果

3 討論

P53是一種抑癌基因，其失活對腫瘤形成起重要作用。P53基因突變能夠產生P53蛋白，后者是一種腫瘤促進因子，不僅可以消除正常P53的抑癌功能，還可以促進腫瘤形成。P53基因突變與乳腺癌的發生密切相關[1]，突變型P53蛋白過度表達與乳腺癌患者術后轉移和復發有關[2]。黃玉鈿等[3]發現P53陽性率與乳腺癌腫塊大小和淋巴結轉移呈正相關，P53基因突變率高的乳腺癌細胞惡性度高、侵襲性強、淋巴結轉移率高。P53基因突變可以上調促進血管增生的內皮生長因子（VEGF），亦能夠產生腫瘤促進因子P53蛋白。

Ki-67是一種核抗原，定位于細胞核，半衰期短，與增殖細胞相關。它存在于細胞周期中除G0期以外的所有階段，并且在M期達到高峰，被公認為是一種敏感、特異的增殖期細胞標志物。Ki-67表達陽性率高者乳腺癌細胞的惡性度高，細胞增殖活躍，因此腫瘤生長速度快、侵襲性強、轉移發生較早，預后差。多項研究已表明，Ki-67在腫瘤組織中的表達情況與預后有關，表達越高，預后越差[4-5]。

p63本身是抑癌基因，也是一種上皮生長調節因子；在一些上皮組織細胞核表達，對上皮組織的生長分化起著重要作用。p63可以檢測乳腺組織中的肌上皮細胞。免疫標記顯示乳腺浸潤性癌癌巢周圍，肌上皮基本消失或無肌上皮圍繞。p63蛋白表達的強度在良性腫瘤較強，惡性腫瘤最弱，p63蛋白的抗原性比較強，有較強的特異性和敏感性。

一般情況下，腫塊越大其臨床分期相對越晚、惡性程度越高、細胞增殖越活躍。本組病例觀察到彩色多普勒超聲顯示腫塊≥2cm以上、血流分級2～3級、淋巴結轉移陽性和周邊組織侵犯者，其P53、Ki-67陽性表達均分別較腫塊<2cm、血流分級0～1級、淋巴結轉移陰性、腫瘤未侵犯周邊組織者明顯增高，p63陽性表達則明顯較低，且差異有顯著性 （P≤0.05）。說明P53、Ki-67的陽性表達與乳腺癌腫塊較大（≥2cm）、血供豐富（2～3級）、淋巴結轉移陽性、侵犯腫瘤周邊組織等呈正相關，p63的陽性表達則呈負相關。而超聲提示乳腺癌腫塊較大、血流豐富、淋巴結轉移陽性、侵犯腫塊周邊組織者，其腫瘤惡性程度相對較高[6]，這一點正好與P53、Ki-67的高表達提示乳腺癌腫瘤惡性較高相呼應。

在乳腺癌的研究中，彩色多普勒超聲檢查和免疫組化兩者可以相互印證、互為補充，二者聯合能夠更好地評估乳腺癌惡性程度和預后。當然，腫瘤的發生發展是一個多基因參與、多因素影響、多發展步驟的復雜的過程，在此過程中，多項指標與乳腺癌的轉移和預后有關，但各指標間并非完全具有相關性。因此，對于乳腺癌的預后，應根據腫塊大小、組織學分級、淋巴結轉移與否及多種基因蛋白表達等指標綜合分析，以便正確判斷預后，制定合理治療方案。

[1]Rohan TE,Li SQ,Hartwick R,et al.p53 alterations and protein accraulation in benign breast tissue and breast cancer risk,a cohort study[J].Cancer Epidemiol Biomarkers Prev,2006,15(7):1316-1323.

[2]Nayak BK,Das BR.Mutation and methylation status of p53 gene promoter in human breast tumours[J].Tumor Biol,1999,20(6):340-348.

[3]黃玉鈿，鄭曦，黃雙月，等.乳腺癌P53、CAl53的表達及意義[J].中國實驗診斷學，2005，9（2）：221-224.

[4]Scomro IN,Holmer J,Whimster WF.Predicting prognosis in lung cancer:use of proliferation marker,Ki67 monoclonal antibody[J].Pak Med Assoc,1998,48(3):66.

[5]鐘定榮，李向紅，桂秋萍，等.Ki67表達在判斷星形細胞瘤惡性程度中的作用[J].軍醫進修學院學報，2002，23（2）：153.

[6]張縉熙，姜玉新.淺表器官及組織超聲診斷學[M].北京：科學技術文獻出版社，2000.133.