賴氨酰氧化酶樣蛋白2對晚期膽道癌患者預(yù)后及化療敏感度的預(yù)測價(jià)值

鄭玉廷, 唐流康, 栗玉龍, 袁 波, 謝 峰

(海軍軍醫(yī)大學(xué)第三附屬醫(yī)院膽道三科, 上海 200438)

膽道癌指的是發(fā)生于膽道的癌癥,近年來發(fā)病率不斷增加,患者往往出現(xiàn)黃疸、體重減輕以及瘙癢等癥狀[1-2]。膽道癌患者早期無明顯癥狀,患者發(fā)現(xiàn)時(shí)多數(shù)已處于中晚期且失去手術(shù)機(jī)會,化療是針對中晚期膽道癌患者進(jìn)行治療的一種重要手段,但是仍有很多患者化療敏感度低,預(yù)后差,尋找有效的預(yù)測患者化療敏感度的指標(biāo)對于臨床具有重要意義[3-4]。賴氨酰氧化酶樣蛋白2(Lysyl oxidase-like 2,LOXL2)抑制劑能夠用于腫瘤學(xué)、纖維化以及炎癥的治療[5],LOXL2高表達(dá)與腸癌、乳腺癌、宮頸癌、腎癌等多種腫瘤的進(jìn)展有關(guān)[6-8]。有研究證實(shí)了LOXL2在膽管癌中表達(dá)失調(diào)[9]。本研究旨在評估LOXL2在晚期膽道癌患者預(yù)后和化療敏感性中的預(yù)測價(jià)值,以期為預(yù)測晚期膽道癌患者化療預(yù)后提供新的指標(biāo)。

1 資料與方法

1.1 一般資料回顧性分析2020年11月-2022年12月海軍軍醫(yī)大學(xué)第三附屬醫(yī)院就診的58例晚期膽道癌患者。納入標(biāo)準(zhǔn):(1)經(jīng)臨床和病理同時(shí)確診為晚期膽道癌;(2)不適合實(shí)施放療、肝移植和切除術(shù);(3)美國東部腫瘤協(xié)作組(Eastern cooperative oncology group, ECOG)評分小于等于2分;(4)預(yù)期生存時(shí)間在3個(gè)月以上。排除標(biāo)準(zhǔn):(1)除膽道癌外存在多個(gè)原發(fā)性腫瘤;(2)ECOG評分超過3分;(3)合并重要器質(zhì)性疾病、自身免疫性疾病等。最終46例患者納入本研究,其中,男性25例,女性21例。

1.2 生物信息學(xué)分析基因表達(dá)譜互作用分析(Gene expression profiling interactive analysis, GEPIA)網(wǎng)站(http://gepia.cancer-pku.cn/detail.php)是一個(gè)用于分析基因表達(dá)的在線工具,能夠幫助研究人員從大規(guī)模的腫瘤和正常組織樣本中進(jìn)行基因表達(dá)分析。本研究借助GEPIA網(wǎng)站預(yù)測LOXL2 mRNA在膽管癌組織中的表達(dá)。

1.3 化療方案(1)奧沙利鉑與吉西他濱聯(lián)合的化療方案:第1天和第8天使用吉西他濱靜脈滴注,劑量1 000 mg/m2; 奧沙利鉑靜脈滴注, 劑量100 mg/m2,1個(gè)化療周期21 d。(2)吉西他濱與順鉑聯(lián)合的化療方案:第1天和第8天通過吉西他濱靜脈滴注,劑量1 000 mg/m2;第1天至第3天靜脈滴注順鉑,劑量80 mg/kg,1個(gè)化療周期為21 d。(3)吉西他濱與替吉奧聯(lián)合的化療方案:第1天和第8天使用吉西他濱靜脈滴注,劑量1 000 mg/m2;替吉奧給藥劑量依據(jù)體表面積,體表面積小于1.25 m2,每日80 mg;體表面積1.25 m2～1.5 m2之間,每日100 mg;體表面積大于1.5 m2,每日120 mg,服用14 d停7 d,一個(gè)化療周期為21 d?；熋舾星闆r根據(jù)實(shí)體瘤療效評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)(Response evaluation criteriain solid tumors, RECIST)進(jìn)行療效評價(jià)[10],如病情緩解或穩(wěn)定,下一周期繼續(xù)使用該方案;如產(chǎn)生不良反應(yīng)無法耐受則停止該方案或者更換方案。

1.4 LOXL2 mRNA檢測采用實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(quantitative real-time polymerase chain reaction, qRT-PCR)檢測LOXL2的mRNA表達(dá),采用Eastep Super試劑盒方案提取總的RNA的(Promega,貨號:LS1020)。借助SYBR試劑盒(Takara),在CFX96實(shí)時(shí)定量儀器(Bio-Rad公司)上完成qRT-PCR反應(yīng)。LOXL2正向引物:5′-CTGCCACATAGGTGGTTCCT-3′, 反向引物:5′-TGGCATTCGTTCAGACTCAG-3′; GAPDH正向引物:5′-AGCTCAAGCATTGGCCGTTG-3′,反向引物:5′-AGGATCCGCAGTACCCTTGC-3′。

1.5 分組與主要觀察指標(biāo)(1)一般資料:患者的性別、年齡、美國東部腫瘤協(xié)作組體能狀態(tài)(Eastern cooperative oncology group performance status,ECOG PS)評分等;(2)手術(shù)方式;(3)腫瘤標(biāo)志物水平:癌胚抗原(Carcinoembryonic antigen,CEA)、糖類抗原19-9(Carbohydrate antigen 19-9)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶( Alanine transaminase , ALT)的水平;(4)根據(jù)RECIST標(biāo)準(zhǔn)對患者化療敏感度進(jìn)行評價(jià)[10]:連續(xù)1個(gè)月內(nèi)檢查結(jié)果顯示目標(biāo)病灶消失且無新病灶出現(xiàn)被認(rèn)定為完全緩解,連續(xù)1個(gè)月內(nèi)檢查結(jié)果顯示目標(biāo)病灶縮小30%及以上被認(rèn)定為部分緩解,目標(biāo)病灶無變化被認(rèn)定為疾病穩(wěn)定,目標(biāo)病灶增加30%以上被認(rèn)定為疾病進(jìn)展。完全緩解和部分緩解的患者被認(rèn)定為化療敏感組,疾病穩(wěn)定和進(jìn)展的患者被認(rèn)定為化療非敏感組,對比兩組LOXL2 mRNA水平。

2 結(jié)果

2.1 膽道癌患者癌組織中LOXL2 mRNA的表達(dá)GEPIA網(wǎng)站預(yù)測結(jié)果顯示LOXL2 mRNA在膽道癌中高表達(dá),見圖1A。與癌旁組織中LOXL2 mRNA表達(dá)水平(1.46±0.21)比較,癌組織中LOXL2 mRNA表達(dá)水平(2.63±0.52)顯著增加(t=14.16,P<0.001)。見圖1B。

2.2 LOXL2 mRNA表達(dá)水平及其與患者臨床病理指標(biāo)的關(guān)聯(lián)與化療敏感組LOXL2 mRNA表達(dá)水平(1.97±0.35)比較,化療非敏感組的LOXL2 mRNA表達(dá)水平(2.56±0.47)增強(qiáng)(t=4.660,P<0.001),見圖2。根據(jù)LOXL2 mRNA表達(dá)的中位數(shù)2.63,LOXL2 mRNA低表達(dá)組18例,高表達(dá)組28例,LOXL2 mRNA表達(dá)水平與化療敏感度存在關(guān)聯(lián)(P=0.002)。見表1。

注:與化療敏感組比較, ***P<0.001。

2.3 LOXL2 mRNA表達(dá)預(yù)測患者化療敏感度的ROC曲線ROC曲線分析顯示,最佳截?cái)嘀禐?.12,AUC=0.828, 見圖3。

圖3 LOXL2 mRNA表達(dá)預(yù)測患者化療敏感度的ROC曲線圖

2.4 不同LOXL2 mRNA表達(dá)水平患者化療后的生存情況隨訪至15個(gè)月時(shí),低表達(dá)組患者生存率為61.11%,高表達(dá)組患者生存率為25.00%。LOXL2 mRNA高表達(dá)組患者的總體生存率顯著低于低表達(dá)組(P=0.032),見圖4。

圖4不同LOXL2 mRNA水平分組患者的術(shù)后生存曲線圖

2.5 影響患者生存的Cox回歸分析結(jié)果Cox回歸分析結(jié)果顯示,CEA、CA19-9以及LOXL2 mRNA水平是影響膽道癌患者化療后生存的獨(dú)立風(fēng)險(xiǎn)因素,見表2。

表2 化療后影響患者總體生存的獨(dú)立危險(xiǎn)因素

3 討論

化療是晚期癌癥患者重要的治療方式,然而患者的化療敏感性表現(xiàn)出差異,這是對患者預(yù)后產(chǎn)生重要影響的因素之一[11-12]。許多研究已經(jīng)展示了不同的分子標(biāo)志物在癌癥患者預(yù)后預(yù)測方面的潛力,為臨床實(shí)踐提供了重要的指導(dǎo)信息[13-14]。已有研究證實(shí)LOXL2在多種癌癥中的表達(dá)異常,例如,LOXL2在骨肉瘤患者癌組織中表達(dá)上調(diào),并且上調(diào)的LOXL2促進(jìn)了骨肉瘤細(xì)胞的增殖和侵襲[15]。此外,Ramos等[16]研究證實(shí)LOXL2在乳腺癌進(jìn)展中起著重要作用,并可作為生物標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)。在膽道癌研究領(lǐng)域,LOXL2的作用也被逐漸揭示,例如,彭濤等[17]研究發(fā)現(xiàn)LOXL2在膽管癌中過度表達(dá),并可能參與調(diào)節(jié)血管生成?；谝陨涎芯拷Y(jié)果,本研究首先利用GEPIA網(wǎng)站進(jìn)行預(yù)測,發(fā)現(xiàn)LOXL2在膽道癌中也呈現(xiàn)上調(diào)的表達(dá)。其次,本研究進(jìn)一步從LOXL2表達(dá)與化療敏感性的角度進(jìn)行驗(yàn)證,發(fā)現(xiàn)化療非敏感組患者的癌組織中LOXL2 mRNA表達(dá)水平較高,提示LOXL2的上調(diào)可能與化療耐藥有關(guān)。

通過比較化療敏感組和化療非敏感組晚期膽道癌患者的LOXL2 mRNA表達(dá)水平,本研究發(fā)現(xiàn)LOXL2 mRNA作為預(yù)測化療敏感性的指標(biāo)具有潛力,其ROC曲線下面積為0.828。這表明LOXL2 mRNA的表達(dá)可能與患者的化療敏感程度相關(guān)。此外,生存曲線分析結(jié)果顯示,表達(dá)LOXL2 mRNA較低的患者具有更好的生存率,進(jìn)一步支持了LOXL2在預(yù)后評估中的重要性。另外,CEA和CA19-9作為腫瘤標(biāo)志物,在多種癌癥中已被證實(shí)具有診斷和預(yù)后預(yù)測的潛力[18-19]。本研究利用COX回歸分析,發(fā)現(xiàn)CEA、CA19-9和LOXL2 mRNA均可作為影響晚期膽道癌患者化療后生存的獨(dú)立風(fēng)險(xiǎn)因素。這些發(fā)現(xiàn)為晚期膽道癌患者化療敏感性和預(yù)后的評估提供了重要的指導(dǎo),并且有助于個(gè)性化治療的實(shí)施。

綜上所述,本研究結(jié)果表明LOXL2在預(yù)測晚期膽道癌化療敏感度以及患者預(yù)后中具有一定價(jià)值。然而,本研究也存在一些局限性。首先,本研究樣本數(shù)量相對較小且來自單中心。其次,雖然本研究考慮了CEA和CA19-9等腫瘤標(biāo)志物,但還可以進(jìn)一步探討其他臨床特征及分子標(biāo)記物與LOXL2的相互關(guān)系,以提高對膽道癌預(yù)后和化療敏感性的綜合預(yù)測能力,并為膽道癌患者的預(yù)后評估和個(gè)體化治療提供更為準(zhǔn)確和可靠的依據(jù),這也是今后研究需進(jìn)一步完善的地方。