AGAP2-AS1在非小細胞肺癌組織中的表達及臨床意義

李景峰 吳淑君 李繼德

肺癌主要包括非小細胞肺癌(NSCLC)、小細胞肺癌,其中NSCLC患者約占80%[1]。早期NSCLC患者采用手術治療術后5年生存率可達86%,但NSCLC早期確診難度大,多數患者確診時已處于晚期,發生腫瘤轉移,5年生存率較低,預后較差[2]。臨床應探索新的NSCLC標志物,以便早期發現NSCLC,并對患者預后進行判斷。長鏈非編碼RNA(lncRNA)屬于一類長度超過200個核苷酸的轉錄本,lncRNA在腫瘤組織中差異表達,在腫瘤發生、發展中起到了重要作用[3]。AGAP2-AS1為一種反義lncRNA,有研究證實,AGAP2-AS1可促進乳腺癌生長,并可激活NF-κB、上調MyD88,誘發曲妥珠單抗耐藥,且AGAP2-AS1為評估膠質母細胞瘤患者預后的重要指標[4-5]。但目前關于AGAP2-AS1在NSCLC組織中的表達及與預后間的關系的研究報道較少,鑒于此,本研究將探討AGAP2-AS1在NSCLC組織中的表達及臨床意義。現報告如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料

回顧性分析2018年1月至2019年12月于我院治療的95例NSCLC患者臨床資料,收集患者NSCLC組織及癌旁正常組織。本研究獲醫學倫理委員會批準。患者中男性56例,女性39例;年齡35～78歲,平均年齡(59.86±4.79)歲;腫瘤直徑1.5～4.3 cm,平均腫瘤直徑(2.98±0.35)cm;TNM分期:Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期各有19例、33例、25例、18例。

1.2 入選標準

納入標準:①患者臨床資料較為完善;②NSCLC均經病理檢查確診;③患者均未接受相關抗腫瘤治療;④年齡≥18歲。排除標準:①精神行為異常,依從性較低;②合并其他惡性腫瘤;③合并嚴重感染。

1.3 方法

1.3.1 儀器及試劑 實時熒光定量PCR儀(7500 Real-Time PCR型,美國應用生物系統公司提供),上海生工生物工程有限公司提供AGAP2-AS1和內參GAPDH引物,美國Invitrogen公司提供TRIzol,大連寶生物有限公司提供實時定量PCR(qPCR)試劑盒SYBR Premix Ex Taq、逆轉錄試劑盒PrimeScriptTM1st Strand cDNA Synthesis Kit。

1.3.2 總RNA提取和qPCR 將1 ml TRIzol加入100 mg組織中,離心后,提取RNA,并采用DEPC水重懸后萃取、純化,取1 μg總RNA,采用PrimeScriptTM1st Strand cDNA Synthesis Kit合成cDNA,混勻擴增產物與SYBR Premix Ex Taq試劑盒內試劑,采用實時熒光定量PCR儀進行qPCR,反應條件:95 ℃ 30 s,40個循環95 ℃ 5 s、60 ℃ 10 s。內參選取GAPDH,采用2-ΔΔCt法對AGAP2-AS1相對表達量進行計算。GAPDH上游引物:5'-TGTAG-GCTCATTTGCAGGGG-3',下游引物:5'-ATGGCAT-GGACTGTGGTCTG-3';AGAP2-AS1上游引物:5'-CACTACACTC-CCTAGCCCCT-3',下游引物:5'-GAGGACGGTCTT-GGGAAAGG-3'。

1.4 評價指標

(1)NSCLC組織及癌旁正常組織中的AGAP2-AS1表達水平。(2)AGAP2-AS1與NSCLC患者臨床病理特征的關系。(3)AGAP2-AS1表達水平與NSCLC患者預后的關系。

1.5 統計學方法

2 結果

2.1 NSCLC組織及癌旁正常組織中的AGAP2-AS1表達水平比較

NSCLC組織中AGAP2-AS1表達水平為(3.21±1.18),高于癌旁正常組織的(1.67±0.64),差異有統計學意義(t=11.182,P=0.000)。

2.2 AGAP2-AS1與NSCLC患者臨床病理特征的關系

腫瘤直徑≥3 cm、TNM分期Ⅲ期+Ⅳ期、 分化程度低分化、淋巴結轉移患者的AGAP2-AS1表達水平高于腫瘤直徑<3 cm、Ⅰ期+Ⅱ期、中分化+高分化、無淋巴結轉移患者,差異有統計學意義(P<0.05);不同年齡及性別患者的AGAP2-AS1表達水平比較,差異無統計學意義(P>0.05)。見表1。

表1 AGAP2-AS1與NSCLC臨床病理特征關系分析

2.3 AGAP2-AS1表達水平與NSCLC患者預后的關系

隨訪2年,95例患者死亡40例,生存55例。死亡組患者的AGAP2-AS1表達水平為(4.22±1.64),高于生存組的(2.37±0.75),差異有統計學意義(t=7.382,P=0.000)。

3 討論

lncRNAs表達改變為腫瘤發生的驅動因素,lncRNA可作為引導員,指引蛋白靶向運動至相應啟動子位點,同時可作為信號分子,結合蛋白質形成復合物,結合啟動子對下游基因轉錄過程進行調節,并可作為誘餌對調控蛋白與啟動子位點結合進行抑制[6-7]。Jia等[8]研究指出,腫瘤在發生、發展過程中,會引起lncRNA異常表達,LncRNA MAFG-AS1過表達參與NSCLC細胞侵襲及遷移的過程,王凱等[9]指出,LncRNA AGAP2-AS1可促進腎細胞癌的侵襲與轉移。

本次研究分析AGAP2-AS1在NSCLC組織中的表達及臨床意義,研究結果顯示,NSCLC組織中AGAP2-AS1表達水平高于癌旁正常組織,腫瘤直徑≥3 cm、TNM分期Ⅲ期+Ⅳ期、 分化程度低分化、淋巴結轉移患者的AGAP2-AS1表達水平高于腫瘤直徑<3 cm、Ⅰ期+Ⅱ期、中分化+高分化、無淋巴結轉移患者。提示出在NSCLC組織中AGAP2-AS1表達水平上調,且與臨床病理參數間關系密切,AGAP2-AS1在腫瘤體積較大、TNM分期較晚、分化程度較低與淋巴結轉移患者中表達水平較高,AGAP2-AS1可起到促癌作用,參與NSCLC的發生、發展。同時研究結果顯示,死亡組患者的AGAP2-AS1表達水平高于生存組,表明AGAP2-AS1表達量與患者預后有關,AGAP2-AS1表達水平越高患者預后越差。馬星等[10]在研究中指出,NSCLC組織AGAP2-AS1表達水平高于癌旁正常組織,TNM分期Ⅱ期、低分化的NSCLC患者AGAP2-AS1低表達人數占比低于TNM分期Ⅰ期、中高分化的NSCLC患者,且AGAP2-AS1高表達為影響患者預后的危險因素,與本次研究結果較為相似。AGAP2-AS1屬于lncRNA家族成員,轉錄位點12q14.1,1567個核苷酸長度,可通過影響miRNAs調節腫瘤細胞生物學行為,在腫瘤生長、繁殖及侵襲中發揮重要的調控作用[11-12]。但本次研究中僅納入95例NSCLC患者,且為回顧性分析研究,還有待臨床開展前瞻性、大樣本量研究,以進一步證實AGAP2-AS1在NSCLC患者中的表達及臨床意義,旨在為NSCLC患者的早期診斷、治療及預后評估提供參考。

綜上所述,AGAP2-AS1在NSCLC組織中表達水平較高,且AGAP2-AS1表達水平與患者臨床病理特征及預后密切相關,可用于NSCLC患者的診治及預后評估。