下調(diào)BECN1抑制人白血病細(xì)胞系THP-1增殖、侵襲和遷移

曾燕坤，洪小穎，陳清林

1.泉州醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校 健康學(xué)院，福建 泉州 362000；2.福建醫(yī)科大學(xué) 醫(yī)學(xué)技術(shù)與工程學(xué)院，福建 福州 350004；3.福建醫(yī)科大學(xué)附屬泉州第一醫(yī)院 檢驗(yàn)科，福建 泉州 362000

BECN1是自噬過程中的關(guān)鍵基因,編碼卷曲肌球蛋白樣BCL2結(jié)合蛋白1(coiled-coil myosin-like BCL2-interacting protein,Beclin 1)[1]。由于自噬在腫瘤發(fā)生發(fā)展中具有雙刃劍作用,Beclin 1在不同腫瘤生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移中的作用頗具爭(zhēng)議[2-3]。目前,在白血病中對(duì)BECN1的研究相對(duì)較少,而關(guān)于其對(duì)白血病細(xì)胞增殖、遷移等的作用,更是鮮有報(bào)道。細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix,ECM)的降解是腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移的重要環(huán)節(jié),而基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMPs)是發(fā)揮這一作用的一組關(guān)鍵酶[4]。其中,MMP 2與MMP 9作為MMPs家族的重要成員,在腫瘤細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)移中尤為重要[5]。因此,本研究擬通過靶向BECN1的shRNA慢病毒感染,建立BECN1穩(wěn)定下調(diào)的白血病THP-1細(xì)胞株,觀察THP-1細(xì)胞增殖、侵襲和遷移能力變化,并初步探討其作用機(jī)制與MMPs的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 細(xì)胞系:人白血病細(xì)胞系THP-1(武漢普諾賽生物技術(shù)有限公司)。

1.1.2 試劑及試劑盒:胎牛血清(Gemini公司);RPMI 1640(Hyclone公司);靶向BECN1的特異性shRNA和陰性對(duì)照慢病毒(上海吉瑪制藥技術(shù)有限公司);嘌呤霉素(Amresco公司);Trizol(Invitrogen公司);PCR引物(上海尚亞生物技術(shù)有限公司);RT-qPCR試劑盒(上海翊圣生物科技有限公司);RIPA細(xì)胞裂解液、BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒(武漢博士德生物工程有限公司);Beclin 1、MMP 2、MMP 9、GAPDH等一抗及HRP標(biāo)記二抗(武漢三鷹生物技術(shù)有限公司);MTT試劑盒(Genview公司);Matrigel基質(zhì)膠和Transwell小室(8 μm)(Corning公司);瑞氏-吉姆薩染液(珠海貝索生物技術(shù)有限公司)。

1.2 方法

1.2.1 細(xì)胞的分組及處理:所有細(xì)胞在37 ℃、5% CO2的條件下,用含 10% 胎牛血清的 RPMI 1640 培養(yǎng)液培養(yǎng),2～3 d 換液 1 次。……