CIRC_0044235靶向miR-574-5p減輕IL-1β誘導的人軟骨細胞損傷

汪 博，張明煥

武漢市第三醫院 武漢大學附屬同仁醫院 1.麻醉科；2.骨科，湖北 武漢 430071

骨關節炎(osteoarthritis)是最常見的與年齡相關的慢性和致殘性關節疾病[1]。然而，骨關節炎的確切發病機制尚未闡明。軟骨細胞是正常軟骨的唯一細胞成分，軟骨細胞損傷與骨關節炎進展相關，包括軟骨細胞凋亡、炎性損傷和氧化應激[2]。最近的研究表明，骨關節炎的發病機制與非編碼RNA相關[3]circRNA可以像海綿一樣與miRNA結合，干擾它們的表達，從而干擾下游的mRNA或蛋白質[4]。類風濕性關節炎患者外周血中的CIRC_0044235顯著降低，可能通過與miR-892a相互作用而在類風濕性關節炎中發揮作用[5]。miR-574-5p是一種在骨關節炎軟骨細胞中高表達的miRNA[6]。但CIRC_0044235對骨關節炎的影響及其機制是否涉及miR-574-5p仍不清楚。基于此，本研究使用白細胞介素(interleukin，IL)-1β誘導軟骨細胞建立骨關節炎的體外模型，分析軟骨細胞中CIRC_0044235與miR-574-5p的調控網絡。

1 材料與方法

1.1 材料

人關節軟骨細胞(上海中喬新舟生物科技有限公司);Trizol(Thermo Fisher Scientific公司)；PrimeScript RT、SYBR Premix Ex Ta Ⅱ試劑盒(TaKaRa Bio公司)；miR-574-5p模擬物、模擬物對照miR-NC、pcDNA、pcDNA-CIRC_0044235、miR-574-5p抑制物anti-miR-574-5p和抑制物對照anti-miR-NC(Gene Pharma公司)；超氧化物歧化酶(super-oxide orgotein dismutase，SOD)檢測試劑盒、乳酸脫氫酶(lactate dehydrofenase，LDH)檢測試劑盒、IL-6酶聯免疫吸附測定法(enzyme-linked immunosor-bent assay，ELISA)試劑盒、IL-10 ELISA試劑盒、RIPA裂解緩沖液、BCA試劑盒和膜聯蛋白V(annexin V)-FITC細胞凋亡檢測試劑盒(上海碧云天生物技術有限公司)；ECL化學發光溶液(北京Solarbio公司)；抗B細胞淋巴瘤/白血病-2(B cell lymphoma/lewkmia-2，Bcl-2)抗體和Bcl-2相關X蛋白(Bcl-2 associated X protein，Bax)抗體(Abcam公司)；pmirGLO載體和熒光素酶檢測試劑盒(Promega公司)。

1.2 方法

1.2.1 細胞的培養與處理：軟骨細胞在含10%胎牛血清+1%雙抗的DMEM培養液中培養，并維持在37 ℃和5% CO2環境中增殖。……