lncRNA ATP6V1B1-AS1對非小細胞肺癌增殖與侵襲的作用及其機制

李依霖，葉軍，何連棟，王嘉俊，許順

（中國醫科大學附屬第一醫院胸外科，沈陽 110001）

肺癌是目前全球范圍內第二高發的癌癥［1］。我國肺癌的發生率和死亡率均排在惡性腫瘤的首位［2］。因此，明確肺癌發生發展的機制意義重大。

非編碼RNA（non-coding RNA，ncRNA）是不編碼蛋白質的RNA，在多種腫瘤的發生發展的調控中起著至關重要的作用［3-5］。ncRNA根據結構可分為環狀RNA和線性RNA，其中線性RNA根據長度可分為微RNA（microRNA，miRNA）和長鏈非編碼RNA（long non-coding RNA，lncRNA）［6］。lncRNA是超過200個核苷酸的ncRNA，可通過組蛋白修飾、染色質重塑、與轉錄因子的相互作用以及DNA甲基化等方式調控基因活性［7］。大量研究［8-11］表明，lncRNA在多種腫瘤中廣泛表達，其異常表達與非小細胞肺癌的增殖、遷移、侵襲等密切相關，但其作用機制尚未明確。在與腫瘤相關的lncRNA中，關于ATP6V1B1-AS1的研究尚未見報道。

本研究通過體外實驗探討ATP6V1B1-AS1在非小細胞肺癌細胞中的表達及其對于非小細胞肺癌增殖和侵襲的影響；并利用生物信息學分析其作用機制，旨在為非小細胞肺癌的治療提供新的靶點。

1 材料與方法

1.1 細胞來源及處理

非小細胞肺癌細胞系（A549、SK-MES-1、1299、H460）及正常人支氣管上皮細胞系（16-HBE）購自中科院細胞庫。10%胎牛血清（美國CLARK Bioscience公司）配置的1640培養基（以色列Biological Industries公司）、MEM培養基（美國Hyclone公司）37 ℃，5%CO2以及飽和濕度中培養。

1.2 總RNA提取及實時定量PCR（quantitative real-time PCR，qRT-PCR）檢測

非小細胞肺癌細胞系及正常人支氣管上皮細胞系總 RNA 均使用 Trizol 試劑提取。使用 Prime Script?RT reagent Kit 反轉錄試劑盒（日本TaKaRa公司）反轉錄和細胞的總 RNA后，使用SYBR?Premix Ex TaqTMⅡ試劑（日本TaKaRa公司）QuantStudio 1 Real-time PCR 儀用進行qRT-PCR檢測。主要引物：ATP6V1B1-AS1，正向引物，5’-TCATTTTCATGAATG CTGCCTCT-3’；反向引物，5’-CTGTGCAAGAATCAC CGTGC-3’；……