miR-217調(diào)節(jié)Runx2/OPN在鈦顆粒誘導(dǎo)小鼠脛骨骨溶解中的作用

張曉倩，王鵬皓，郭磊

（中國醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院骨科，沈陽 110001）

假體周圍骨溶解（periprosthetic osteolysis，PPOL）是影響人工假體壽命的主要限制因素之一。研究［1］發(fā)現(xiàn)，全髖人工關(guān)節(jié)置換術(shù)后約5.5%的患者和3.1%的全膝人工關(guān)節(jié)置換術(shù)患者接受了PPOL導(dǎo)致的翻修手術(shù)。人工關(guān)節(jié)的翻修手術(shù)具有巨大的挑戰(zhàn)性，可能伴隨嚴(yán)重的并發(fā)癥［2］。最近的研究［3］表明，假體-骨界面產(chǎn)生的磨損顆粒誘發(fā)慢性炎癥并破壞骨穩(wěn)態(tài)，誘發(fā)PPOL，進(jìn)而導(dǎo)致假體無菌性松動，因此，防止PPOL的關(guān)鍵在于抑制磨損微粒誘導(dǎo)的骨溶解反應(yīng)。研究［4］顯示，微RNA（microRNA，miRNA）參與的基因調(diào)控對靶基因的表達(dá)可產(chǎn)生廣泛影響。miR-217在腎小球系膜細(xì)胞、乳腺癌上皮細(xì)胞和肝癌細(xì)胞中發(fā)揮多種生物學(xué)功能［5］。本研究擬構(gòu)建小鼠脛骨PPOL模型，探討miR-217在鈦微粒誘導(dǎo)骨溶解中的作用機(jī)制，以期為PPOL的防治提供新靶點(diǎn)和組織工程化相關(guān)數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動物、試劑及儀器

12周齡成年雄性C57BL/6小鼠（購自中國醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心）40只，體質(zhì)量（25±2）g。兔抗鼠矮小相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子2（runt-related transcription factor 2，Runx2）抗體、抗骨橋蛋白（osteopontin，OPN）抗體（美國 Sigma公司），GAPDH抗體（北京中杉金橋生物有限公司），miR-217 mimics（上海吉凱基因醫(yī)學(xué)科技股份有限公司），TRIzol試劑（美國Thermofisher公司），ABIPrism7500序列檢測系統(tǒng)（美國Beyotime公司）。

1.2 磨損顆粒制備

100%無水乙醇浸泡去內(nèi)毒素處理后鈦顆粒，離心，紫外線下照射24 h，浸泡于無菌 PBS，4 ℃放置待用。

1.3 動物模型建立

采用針植入加鈦顆粒手術(shù)方法建立小鼠脛骨PPOL動物模型。10%水合氯醛腹腔注射（30 mg/kg）麻醉小鼠，選擇右膝關(guān)節(jié)髕骨旁內(nèi)側(cè)切口，長度5 mm，暴露脛骨平臺，0.8 mm牙鉆鉆孔至脛骨骨髓腔，孔直徑1 mm，深5 mm?！?br>