寬體金線蛭WpE基因的克隆及生物信息學分析

程搏幸，盧昱希，匡詩濤，吳正關(guān)，田青青，邵貴燕，劉 飛*

(1. 貴州師范學院生物科學學院，貴州 貴陽 550018；2. 貴州省農(nóng)業(yè)科學院畜牧獸醫(yī)研究所，貴州 貴陽 550002；3. 鹽城工學院海洋與生物工程學院，江蘇 鹽城 224051)

0 引言

寬體金線蛭(Whitmaniapigra)俗稱為螞蟥，是藥材水蛭基原動物之一，收錄于《中國藥典》(2020年版)，具有活血通經(jīng)的功效[1]，在抗凝血、抗炎、溶解血栓等方面有顯著療效[2]。目前，從寬體金線蛭體內(nèi)分離或篩選得到anti-THR、Pigrin[3]、WP-30[4]、WPI01[5]、WA3-1、Whittide[6]等具有抗凝血或溶解血栓活性的蛋白質(zhì)。

Eglin C屬于馬鈴薯抑制劑Ⅰ(Potato inhibitor Ⅰ，PI-Ⅰ)家族，是絲氨酸蛋白酶抑制劑眾多家族中的一員，具有抑制胰凝乳蛋白酶的功能[7]。1977年，從歐洲醫(yī)蛭(Hirudomedicinails)中分離純化得到Eglin C，能抑制組織蛋白酶G、彈性蛋白酶、胰凝乳蛋白酶和枯草桿菌蛋白酶等的蛋白活性，具有止血、抗炎等功效[8]。

目前，關(guān)于寬體金線蛭的研究主要集中在動物養(yǎng)殖[9]及其抗凝等藥用價值[10]方面，而對于寬體金線蛭體內(nèi)具有抗炎生物活性成分的篩選及其作用機理的研究較為鮮見。從寬體金線蛭唾液腺轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫(未發(fā)表)中篩選到匹配EglinC基因的轉(zhuǎn)錄本，克隆寬體金線蛭WpE基因，對該基因進行生物信息學分析，旨在為深入研究WpE基因功能和進一步開發(fā)利用寬體金線蛭提供科學依據(jù)。

1 材料與試劑

1.1 實驗材料

所用材料來自江蘇省寶應縣，經(jīng)作者鑒定為寬體金線蛭(W.Pigra)。選擇健康、體表無傷痕的寬體金線蛭作為研究對象，冰上無菌解剖后收集其唾液腺，置于-80℃的冰箱中保存。

1.2 試劑

RNAiso Plus總RNA提取試劑、PrimeScriptTMII 1st Strand cDNA Synthesis Kit均購自大連TaKaRa有限……