miR-7靶向缺氧誘導因子1α對肝癌細胞的影響*

郭 康 黨 珊

（新鄉醫學院，1 第三附屬醫院腫瘤內二科，2 三全學院，453003 新鄉）

肝癌是一種具有較高發病率和死亡率的實體惡性腫瘤，全球每年約50%新發病例在我國，且臨床死亡率一直居高不下[1]。近年來，隨著基因組學和表觀遺傳學的不斷發展，越來越多研究顯示原癌基因激活和抑癌基因失活與癌癥的發生密切相關[2]。微小RNA（miR）是一類非編碼蛋白的小分子RNA，目前已有研究表明其作為癌基因或抑癌基因在多種腫瘤組織中表達異常，且參與調控腫瘤細胞的增殖、侵襲、轉移等過程。miR-7在肝癌、肺癌、乳腺癌等惡性腫瘤組織中表達降低，且能通過靶向不同目的蛋白調控腫瘤細胞侵襲、凋亡、化療耐藥等過程[3-4]。目前關于miR-7對肝癌細胞的許多生物學行為的調控機制尚未完全明確，本研究旨在探討miR-7對肝癌細胞MGCC97H侵襲、轉移、干細胞特性的影響及分子機制。

1 材料和方法

1.1 主要試劑

MGCC97H細胞（ATCC）；DMEM、胎牛血清、青鏈霉素、胰酶、轉染試劑盒（美國Hyclone公司）；質粒載體miR-7模擬物、pc-HIF1α及HIF-1α突變型和野生型（Genepharm公司）；TRIzol、RNA提取試劑盒及RT-PCR試劑盒（大連寶生生物科技公司）；缺氧誘導因子1α（hypoxia-inducible factor 1α，HIF-1α）、β-actin及二抗（南京福麥斯生物公司）； Transwell小室（美國BD公司）；EdU試劑盒（美國Santa Cruz公司）；雙熒光素酶基因檢測試劑盒（美國Promega公司）。

1.2 細胞培養及分組處理

細胞在含10%胎牛血清的DMEM培養基中常規培養，在37℃ 5% CO2培養箱中培養到指數期，胰酶消化后接種于6孔板，待細胞生長到貼壁后采用慢病毒感染細胞，并按照處理方式不同分為對照組（不做處理）、miR-7模擬物組（轉染miR-7模擬物）、miR-7干擾組（轉染miR-7模擬物+scramble，為miR-7模擬物組的陰性對照）、HIF1α過表達組（轉染pc-HIF1α）和共轉染組（轉染miR-7模擬物+pc-HIF1α），培養48 h后進行檢測。……