微小RNA-324-5p在頸動脈粥樣硬化患者血清中的表達水平及預后評估價值分析

周濤龍 黃麗芳 袁 昊 李艷芳

（珠海市慢性病防治中心，廣東 珠海 519000）

頸動脈粥樣硬化是因細胞、細胞外基質及膽固醇聚集而引起動脈壁硬化、增厚誘發的一種疾病，免疫細胞、血源性炎癥因子、血管平滑肌細胞及血管內皮細胞是頸動脈粥樣硬化病變的幾個主要組成部分[1]。現階段，大量臨床研究已經闡明了誘發頸動脈粥樣硬化的發病機制，由于受動脈壁上滯留的脂蛋白修飾和氧化作用影響，導致血管發生慢性炎癥，單核細胞及T細胞均被吸引至血管壁上，單核細胞隨后遷移到血管內膜上并轉化為巨噬細胞，然后將脂蛋白吸收后形成泡沫細胞，同時增厚的動脈內膜導致產生脂肪條紋，而脂肪條紋最后會發展形成粥樣斑塊[2-3]。雖然在明確該類發病機制的基礎上采取了針對性治療方案，對患者疾病預后有了明顯改善，但頸動脈粥樣硬化與心血管代謝紊亂依然是主要的發病和致死原因。因此，迫切需要探索新的診斷方法和尋找更敏感的血清標志物來檢測、預防、治療頸動脈粥樣硬化。微小RNA是一種非編碼的內源性小RNA分子，是調控細胞黏附、遷移、增殖、轉移、侵襲及炎癥反應的重要因子，可調控多種疾病的病理發展過程[4]。本研究觀察微小RNA-324-5p在頸動脈粥樣硬化患者血清中的表達水平及預后評估價值，報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

納入2020年6月至2021年6月本院收治的80例經實時熒光定量PCR檢測頸動脈超聲確診的頸動脈粥樣硬化患者（實驗組）及經實時熒光定量PCR檢測明確的80例健康者（對照組）為研究對象。排除腦中風、心臟病、心絞痛、心力衰竭、高血壓、糖尿病、肝腎功能不全、短暫性缺血事件、風濕性免疫疾病、癌癥及其他心血管疾病患者，所有受試者對本研究知情同意。

1.2 方法

所有受試者禁食一晚后集中采集外周靜脈血，分離血清后備用。將TRIzol添加入受試者血清中提取總RNA，按說明書操作說明將RNA逆轉為cDNA。使用SYBR green I Master Mix試劑盒在實時PCR系統上實施熒光定量PCR反應，將U6作為反應過程中內參，用2△△Ct方法對微小RNA-324-5p的相對表達量進行計算。

1.3 觀察指標

比較兩組微小RNA-324-5p在頸動脈粥樣硬化患者血清中的表達水平；分析微小RNA-324-5p的表達量與CIMT值相關性及其預后評估價值。所有受試者均進行為期4年隨訪，在固定時間點記錄受試者心血管終點事件，包括心肌梗死、卒中、急性心衰、短暫性腦缺血發作、冠狀動脈介入治療、不穩定性心絞痛、周圍血管介入等導致的住院及死亡。

1.4 統計學分析

2 結 果

2.1 比較兩組的一般資料

兩組性別、年齡、體質量指數比較，差異無統計學意義（P>0.05），見表1。

表1 兩組一般資料對比（±s）

表1 兩組一般資料對比（±s）

組別對照組實驗組χ2/t值P值例數（n）80 80男32 34女48 46年齡（歲）55.17±2.41 55.39±2.62 0.553 0.581體質量指數（kg/m2）26.87±2.06 26.54±2.25 0.968 0.335性別0.103 0.748

2.2 比較兩組微小RNA-324-5p表達水平

實驗組微小RNA-324-5p在頸動脈粥樣硬化患者血清中的相對表達量為（1.37±0.32），對照組相對表達量為（1.59±0.74），實驗組微小RNA-324-5p表達水平明顯低于對照組，差異有統計學意義（t=2.441，P=0.016）。

2.3 頸動脈粥樣硬化患者RNA-324-5p表達水平與CIMT值相關性分析

本研究中頸動脈粥樣硬化患者的CIMT平均值是（0.924±0.241）mm，Spearman相關性系數分析結果顯示，微小RNA-324-5p在CIMT值相對較低的頸動脈粥樣硬化患者中表達，并且微小RNA-324-5p的表達量與CIMT值呈負相關，差異有統計學意義（P＜0.001）。見圖1。

圖1 頸動脈粥樣硬化患者RNA-324-5p表達水平與CIMT值相關性

2.4 微小RNA-324-5p在頸動脈粥樣硬化患者總體生存率中的預后評估價值分析

單因素和多因素Cox回歸分析結果顯示，微小RNA-324-5p是頸動脈粥樣硬化的獨立預后因子，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表2。

表2 頸動脈粥樣硬化患者單因素和多因素Cox回歸分析

3 討論

微小RNA-324-5p在17p染色體之上，該基因在髓母細胞瘤、肝癌等不同類型癌癥中具有異常重要的調控作用。當心肌缺血再灌注損傷后，患者的微小RNA-324-5p表達水平會隨之有所降低，微小RNA-324-5p水平調控會對線粒體凋亡、分裂及心肌梗死產生影響，具體機制是MTFR1/微小RNA-324-5p/NFAT4為一個信號軸，共同參與心肌細胞凋亡及線粒體裂變的調節[5-6]。且有研究指出，在二尖瓣狹窄、心力衰竭、擴張型心肌病、缺血性心肌病中微小RNA-324-5p及RNA-199a-3p表達處于失調狀態[7]。本研究中，實驗組微小RNA-324-5p在頸動脈粥樣硬化患者血清中的表達水平明顯低于對照組（P＜0.05），這與頸動脈粥樣硬化的并發癥缺血性心肌病及心力衰竭的表達水平一致。

CIMT能夠借助頸動脈超聲在患者體內實施精準測定，是臨床診斷評估頸動脈粥樣硬化可靠而簡便的亞臨床指標。相關流行病學資料表明，CIMT值變化與未來是否發生心血管事件之間具有顯著相關性，且CIMT值提升已經被證實是頸動脈粥樣硬化發病的敏感標志物[8]。本研究通過檢測受試者CIMT值發現，Spearman相關性系數分析結果顯示，微小RNA-324-5p在CIMT值相對較低的頸動脈粥樣硬化患者中表達，并且微小RNA-324-5p的表達量與CIMT值呈負相關（P＜0.05）。研究提示微小RNA-324-5p低表達是診斷頸動脈粥樣硬化新的潛在標志物。另外，本研究對受試者進行隨訪并通過多因素的Cox回歸分析，結果顯示微小RNA-324-5p是頸動脈粥樣硬化的獨立預后因子（P＜0.05）。研究提示微小RNA-324-5p低表達的頸動脈粥樣硬化患者發生不良心血管事件的概率更高，可輔助用于評估患者的預后恢復情況。

綜上所述，頸動脈粥樣硬化患者存在微小RNA-324-5p低表達，可作為臨床診斷的潛在血清標志物，且微小RNA-324-5p低表達與患者預后不良密切相關。