咖啡因與光照誘導斑馬魚睡眠剝奪模型行為學研究

冉思邈，譚愛華，石和元，王 平

（湖北中醫藥大學老年醫學研究所，湖北武漢 430065）

斑馬魚容易大規模飼養，3 個月可性成熟，雌魚每周可產卵1 次，每次產卵約為200～300枚，受精在體外完成，透明可見，便于觀察。由于斑馬魚與人類基因同源性高，可作為多種實驗動物模型的斑馬魚備受科研工作者的青睞。目前斑馬魚睡眠剝奪的方式主要有光照、咖啡因、持續流動水流、感官刺激、電刺激、物理搖晃等方式［1-4］。其中持續流動水流、感官刺激和電刺激需要專用的儀器與設備，而作為誘導睡眠剝奪方便快捷方式的光照與咖啡因對實驗室要求較低，運用較多。但使用光照與咖啡因進行睡眠剝奪后，兩者對斑馬魚行為學影響有何差異未見報道，本研究對兩種方式誘導斑馬魚睡眠剝奪模型后表型和行為學改變進行了比較。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

實驗動物采用野生型AB 系斑馬魚，購自中國科學院水生生物研究所國家斑馬魚資源中心，飼養于湖北中醫藥大學老年醫學研究所斑馬魚實驗室。斑馬魚胚胎的繁殖以自然成對交配的方式進行，斑馬魚幼魚生長到5 dpf 時神經系統與器官已基本發育成熟，故本次實驗采用5 dpf 的幼魚進行。飼養條件如下：魚房溫度為（28.5±1）℃，光暗條件為14∶10 h 循環交替，養魚水pH 值為7.0～8.0，在此期間斑馬魚可從自身卵黃囊中獲取營養，無需喂食。

1.2 主要試劑及儀器

咖啡因（CAS. NO. 58-08-2），體視顯微鏡（PXS-1020，上海蔡康光學儀器有限公司），斑馬魚行為分析系統（Videotrack Track 3.5，法國View Point Life Sciences），96 孔板（Nest Biotech，批號：701001）。

1.3 方法

1.3.1 藥 物 制 備 配 置 濃 度 為200 μ mol/L［5］的咖啡因養魚水溶液，現配現用。……