匯仁腎寶片對脾虛模型大鼠的影響

★ 高羽 胡浩武 李勝華 周青罡 邢小燕 孫曉波（.江西匯仁藥業股份有限公司 南昌 33005；.中國醫學科學院北京協和醫學院藥用植物研究所 北京 0093）

匯仁腎寶片由22 味中藥精制而成，包含淫羊藿、補骨脂、制何首烏、蛇床子、熟地黃、當歸、金櫻子、黃芪、紅參等，具有調和陰陽、溫陽補腎、扶正固本的功效，臨床上適用于治療腰腿酸痛、陽痿遺精、精神不振、夜尿頻多、畏寒怕冷、婦女月經過多、白帶清稀等癥狀。腎寶片為非處方藥，近年來隨著用藥人群日益廣泛，少部分患者偶見惡心、嘔吐、腹瀉等不良反應。有研究表明有些藥物的不良反應多發生于脾胃虛弱患者［1］。為此，本實驗建立脾虛大鼠模型，給予腎寶片，觀察腎寶片對脾虛模型大鼠的影響，以驗證其是否產生某些不良反應，為臨床安全使用提供實驗依據。

1 材料與方法

1.1 材料 酶標儀（帝肯上海公司）；電子天平（梅特勒托利多儀器上海有限公司）。

SPF 級SD 大鼠70 只，雄性，體質量160～180 g，由北京維通利華實驗動物技術有限公司提供，實驗動物生產許可證號SCXK（京）2016-0006。大鼠飼養環境為屏障系統，室溫20～26 ℃，濕度40%～70 %，換氣量15 次/h，光照12 h。

腎寶片細粉（江西匯仁藥業股份有限公司，批號：1703111）；利血平注射液（天津金耀藥業有限公司，批號：140241）；人白細胞介素2（IL-2）試劑盒（批號：A003000）、人白細胞介素6（IL-6）試劑盒（批號：A002998）、腫瘤壞死因子α（TNF-α）試劑盒（批號A002987）均購于北京易科拜德科技有限公司。

1.2 方法 50 只雄性SD 大鼠適應性飼養7 d 后，隨機取10 只為空白對照組，其余動物每日腹腔注射利血平0.5 mg/（kg·d），連續10 d，空白對照組按照同樣的方式給予生理鹽水。造模結束后，以體重減輕、肛溫降低、出現典型的脾虛癥狀為標準，對造模成功的大鼠進行重新隨機分組，分為4組：脾虛模型組及腎寶片高、中、低劑量（1 323、661.5、330.75 mg/kg，分別相當于臨床劑量的2 倍、1 倍、0.5 倍）。腎寶片各劑量組灌胃給藥，空白對照組、模型組灌胃同體積飲用水。每日1 次，連續給藥7 d。

1.3 觀測指標 體重測定：用電子天平稱量，每周稱量1 次。

肛溫測定：溫度計涂上凡士林后從肛門插入3.5 cm，測量3 次取均值，每天測量。

一般狀態觀察：倦怠懶動、瞇眼、弓背、蜷縮堆聚、糞便溏泄、皮毛干燥情況。每天均進行一般狀態情況觀察，并進行評分、記錄、拍照。評分標準為：無癥狀計為0 分，輕度癥狀計為1 分，嚴重癥狀計為2 分。

脾臟及胸腺臟器指數測定：實驗結束后，將各組動物脫臼處死，解剖剝離脾臟及胸腺，用電子天平稱定質量，計算臟器指數。

血清生化指標的測定：末次給藥后，各組大鼠禁食不禁水16 h，經腹腔注射100 mg/L 水合氯醛（3.5 mL/kg）麻醉，腹主動脈取血，3 500 r/min 離心15 min 分離血清。采用IL-2、IL-6、TNF-α 測試盒進行檢測。

1.4 統計學方法 采用SPSS 18.0 統計學軟件分析。計量資料以（±s）表示，行t檢驗。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 對大鼠體重的影響 采用利血平復制大鼠脾虛模型前，各組動物體重均無統計學差異。造模后所有模型動物體重與對照組相比顯著下降（P<0.01）。給藥7 d 后，各給藥組動物體重與模型組相比沒有明顯差異（P>0.05）。

2.2 對大鼠肛溫的影響 采用利血平復制大鼠脾虛模型前后，各組動物肛溫均無統計學意義（P>0.05）。給藥7 d 后，各組動物肛溫仍沒有明顯差異（P>0.05）。

2.3 對大鼠一般狀態的影響 采用利血平造模前，各組動物活動、行為正常，反應機敏，被毛光潔，無瞇眼、弓背、蜷縮、大便無稀溏，每只受試動物均未見其它異常表現。造模后，造模組動物出現嚴重瞇眼、弓背、蜷縮、倦怠、糞便時軟時稀等癥狀。給藥7 d 后，與模型組比較，腎寶片高、中、低劑量組大鼠精神好轉、活動增多、大便由稀變干，一般狀態評分顯著降低（P<0.01），一般狀態有所改善，見表1。

表1 腎寶片對脾虛大鼠一般狀態的影響（±s，n=10）分

表1 腎寶片對脾虛大鼠一般狀態的影響（±s，n=10）分

注：與對照組比較，#P<0.01；與模型組比較，*P<0.01。

組別造模前造模后給藥1 周給藥前低劑量組0±04.0±1.6#0.9±0.6#*中劑量組0±04.6±1.1#0.7±0.5#*高劑量組0±05.2±1.4#1.0±0#*對照組0±00±00±0模型組0±04.0±1.7#2.5±0.5#

2.4 對脾虛模型大鼠臟器指數的影響 與對照組比較，模型組的胸腺重量指數、脾臟重量指數無顯著差異；與模型組比較，各給藥組的胸腺重量指數、脾臟重量指數無顯著差異。

2.5 對脾虛模型大鼠血清生化指標的影響 與對照組比較，模型組血清的IL-2 明顯降低（P<0.05）；與模型組比較，腎寶片各給藥組的IL-2、IL-6、TNF-α 含量無顯著差異，但高劑量組對IL-2 有一定程度的升高。見表2。

表2 腎寶片對脾虛模型大鼠血清生化指標的影響（±s，n=10） pg/mL

表2 腎寶片對脾虛模型大鼠血清生化指標的影響（±s，n=10） pg/mL

注：與對照組比較，#P<0.05。

組別IL-2IL-6TNF-α低劑量組 621.68±77.4858.65±9.8380.04±14.60中劑量組 585.02±66.8759.30±4.5476.25±3.94高劑量組 669.23±117.4161.07±11.0585.49±13.33對照組626.08±102.5962.17±7.8680.51±15.21模型組562.71±122.64#57.15±14.2480.31±19.35

3 討論

利血平所致脾虛證模型是較經典的方法之一［2-3］，本實驗采用腹腔注射利血平的方法復制脾虛大鼠模型。大鼠脾虛模型的評估標準主要是體質量下降，消瘦；倦怠，懶動；肛溫無明顯變化；糞便時軟、時溏；食量減少［4］。本實驗中，利血平連續注射10 d，造模組大鼠出現體重下降、嚴重瞇眼、弓背、蜷縮、倦怠，糞便時軟時稀，偶有便塘等癥狀，一般狀態評分顯著降低，類似中醫脾虛的臨床表現，說明脾虛大鼠模型造模成功。

脾虛狀態下，造血系統功能減弱，氣血化生不足，引起免疫系統功能異常［5］。脾臟和胸腺指數以及細胞因子如IL-2、IL-6 與TNF-α 是反映動物機體免疫功能的最基本的指標［6］。本實驗結果顯示，與模型組比較，腎寶片高劑量組對IL-2 有一定程度的升高，提示腎寶片有使脾虛大鼠低下的免疫學指標恢復至正常水平的趨勢。

本次實驗中，脾虛大鼠給予腎寶片后一般狀態得到明顯改善，并未引起胃腸道的不良反應，如嘔吐、腹瀉等，反而大便由稀變干。結合項目組前期進行的腎寶片對正常大鼠長期毒性試驗研究，在腎寶片給藥6 個月期間動物的外觀體征、被毛狀態、行為活動、糞便形狀及顏色等均無異常［7］。這提示腎寶片在臨床使用時少部分患者出現的嘔吐、腹瀉等胃腸道癥狀，應該與藥物本身無關。究其原因，可能與患者的體質、飲食起居或同時合用其他藥物引起藥物相互作用等有一定關系。