CXCR2對胃癌細胞侵襲、遷移及凋亡的影響

陸偉輝， 劉 威， 王 聰， 王正林

（1.復旦大學附屬中山醫院青浦分院普外科，上海 201700；

2.復旦大學附屬中山醫院普外科，上海 200032）

CXC類趨化因子受體2（C-X-C motif chemokine receptor，CXCR2）是促炎趨化因子的主要受體，主要表達于中性粒細胞、漿細胞、單核細胞、巨噬細胞以及內皮細胞[1-3]。其與腫瘤發生、發展密切相關。Robinson等[4]研究顯示，CXCR2促進腦腫瘤的生長及進展。CXCR2活化促進乳腺癌侵襲、轉移[5]。既往研究顯示CXCR2在胃癌組織中高表達，是胃癌病人的獨立不良預后因素[6-8]，但其作用機制仍不明確。本研究旨在探索CXCR2對胃癌細胞侵襲、遷移和凋亡的影響。

材料與方法

一、材料

胎牛血清 （批號：16000-044）、Trizol試劑 （批號：15596-026）、Optim-MEM 培養基 （批號：51985-034）均購自美國Gibco公司。RPMI-1640培養基（批號：R8758）購自Sigma公司。細胞計數試劑盒（CCK-8，批號：C0038）購自 Beyotime公司。 CXCR2 siRNA（批號：AM16708）和 Lipofectamine 2000 購自Invitrogen公司。膜聯蛋白Ⅴ（AnnexinⅤ）/碘化丙啶（propidium iodide,PI）凋亡檢測試劑盒（批號：556547）購自BD Pharmingen公司。白細胞介素8（interleukin 8,IL-8）ELISA試劑盒（批號：D8000C）購自R&D公司。CXCR2抗體（批號：ab14935）購自Abcam公司。Transwell侵襲小室（批號：3422）購自美國Costar公司。

二、細胞培養與轉染

人胃癌細胞SGC-7901、MGC80-3購自中國科學院上海生命科學研究院。所有細胞培養于含10%胎牛血清的RPMI-1640培養基中，在37℃、5% CO2培養箱培養。

三、蛋白質印跡法

收集細胞，用細胞裂解液裂解細胞提取總蛋白。十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE）分離，恒流300 mA轉移至聚偏氟乙烯（polyvinylidene fluoride,PVDF）膜。磷酸緩沖鹽溶液（phosphatebuffersaline,PBS）洗滌膜3次，每次5min，加入適當比例稀釋的一抗，4℃過夜。去除洗滌液，立即加入稀釋的二抗，搖擺床上室溫培養2 h。結束后去除洗滌液，PBS中洗滌3次，每次10 min。取電化學發光 （electrochemilumine scence,ECL）試劑加膜上，約1 min，使用計算機自動顯影系統（ImageQuant LAS 4000 mini）進行顯影。……