急性冠脈綜合征血漿中ROCK1和ROCK2的表達研究

陳林榕，許堅鋒，梁宇鵬，李創鵬，孫 靜，劉培中，張和針

(廣東省中醫院珠海醫院，廣東 珠海 519015)

急性冠脈綜合征(Acute coronary Syndrome，ACS)是一組急性心肌缺血引起的臨床綜合征。冠狀動脈內粥樣硬化斑塊不穩定，繼而出現破裂、出血，血小板激活伴血栓生成，冠狀動脈張力變化甚至痙攣是ACS的基本共同病理生理基礎。臨床上主要包括不穩定型心絞痛、非ST段抬高型心肌梗死和ST段抬高型心肌梗死，具有發病急、病情重、變化快、預后差的特點。研究表明[1]，Rho激酶(Rho associated coiled-coil forming protein serine/threonine kinase，ROCK)參與調節平滑肌細胞功能和細胞因子的黏附、遷移，與動脈粥樣硬化和冠心病的發生發展密切相關。本研究通過檢測ACS患者血清中ROCK1和ROCK2的表達，探討Rho激酶與急性冠脈綜合征兩者之間的關系。

1 資料與方法

1.1一般資料：選取2018年1月～2019年12月于廣東省中醫院珠海醫院內科住院診斷急性冠脈綜合征患者70例，其中診斷急性心肌梗死組(AMI組)38例，男26例，女12例，年齡43～78歲，平均(61.5±5.6)歲；不穩定性心絞痛組(UA組)32例，男23例，女9例，年齡38～79歲，平均(60.4±8.7)歲；非冠心病(對照組)31例，男17例，女14例，年齡39～78歲，平均(61.7±9.3)歲。收集各組病例和對照組患者血液樣本及記錄基本個人資料。本次研究經過本院醫學倫理委員會同意。

診斷標準：①參照2017年歐洲心臟病學會(ESC)公布的《急性ST段抬高型心肌梗死(STEMI)診斷和治療指南》；②參照2007年美國心臟協會(AHA)/美國心臟病學會(ACC)《不穩定性心絞痛(UA)/非ST段抬高抬高型心肌梗死(USTEMI)診療指南》。

排除標準：①穩定性心絞痛；②陳舊性心肌梗死；③嚴重性心力衰竭；④惡性心律失常；⑤其他嚴重疾病(比如嚴重肝腎功能不全、急性消化道大出血、急性腦血管病、甲狀腺功能亢進、結締組織疾病等)。

1.2實驗方法

1.2.1ROCK1和ROCK2的表達檢測：抽取各組患者肘靜脈血2 ml，置于EDTA作為抗凝劑管內，混合10～20 min，離心20 min(2 500轉)，收集上清液保存于EP管內并放置到-80℃冰箱內保存以待測。血漿ROCK1和ROCK2水平均采用ELISA法測定，試劑盒購自廣州吉英生物科技有限公司，應用雙抗體夾心法測定。主要實驗步驟根據試劑盒要求進行，主要包括加樣、加酶、溫育、洗滌、顯色、終止及測定等步驟。

1.2.2冠脈病變程度的評定

1.2.2.1冠狀動脈造影采用標準Judkins法：投照行左、右冠狀動脈造影。以左主干、左前降支、左回旋支、右冠狀動脈為主要血管，多個體位投照造影發現血管狹窄直徑>50%為有意義。根據病變的血管數分為：單支病變、雙支病變和三支病變；除外的是左主干(LM)病變定義為雙支病變。

1.2.2.2Gensini評分方法：見表1。根據冠狀動脈造影結果，以狹窄程度評分乘以相應的評分系數，計算出所有病變的總分。

表1 Gensini評分的方法

2 結果

2.1各組患者臨床資料的比較：患者基本臨床資料見表2。在ACS各組及對照組間性別、年齡、吸煙狀況、高血壓史、高脂血癥史、糖尿病史、血壓、心率、體質量指數(BMI)之間差異。

表2 各組患者基本臨床資料的比較

與對照組比較，AMI組空腹血糖升高，差異有統計學意義(P<0.05)；其余各項比較差異無統計學意義(P>0.05)。

2.2三組ROCK1、ROCK2、ROCK水平比較：AMI組及UA組患者血漿中ROCK1、ROCK2、ROCK水平均高于對照組，差異有統計學意義(P<0.01)，并且AMI組ROCK1、ROCK2、ROCK高于UA組，ROCK2表現更明顯，差異均有統計學意義(P<0.01)。見表3。

2.3冠狀動脈病變程度與ROCK1、ROCK2、ROCK水平的關系:急性冠脈綜合征患者中三支病變組的ROCK1、ROCK2、ROCK水平高于雙支和單支病變組，差異有統計學意義(P<0.01)，雙支病變組與單支病變組對比各項未見統計差異，見表4。Gensini評分≥20分組ROCK1、ROCK2、ROCK水平明顯高于Gensini評分<20分組，其中ROCK1更加明顯，差異有統計學意義(P<0.01)。見表5。

表3 三組血漿ROCK1、ROCK2、ROCK水平比較

表4 不同冠狀動脈病變支數血漿ROCK1、ROCK2、ROCK水平比較

表5 觀察組不同Gensini評分組血漿ROCK1、ROCK2、ROCK水平比較

3 討論

急性冠脈綜合征一組急性缺血性心臟病，臨床上包括不穩定型心絞痛、非ST段抬高型心肌梗死、ST段抬高型心肌梗死，無不嚴重危害患者的身體健康和生活質量。冠狀動脈粥樣硬化斑塊不穩定，繼發出現斑塊潰瘍、破裂、出血，血小板激活聚集伴血栓生成、冠狀動脈張力變化甚至痙攣是ACS基本的病理生理基礎。

Rho激酶(ROCK)是一種絲氨酸/蘇氨酸激酶，在哺乳動物中，Rho激酶存在ROCK1(ROCKβ)和ROCK2(ROCKα)兩種異構體，ROCK1與ROCK2均分布于大部分器官，在主動脈、大腦、心臟中含量較高，ROCK1在膀胱和主動脈中表達最多，ROCK2則在主要在大腦中表達。ROCK2主要位于細胞質中，僅少量位于細胞膜上。在分子水平，ROCK表達上調促進炎性反應、氧化應激、血栓形成和纖維化的各種因子，下調內皮源型一氧化氮合成酶。在細胞水平，ROCK介導細胞基因表達、胞質分裂、細胞增殖和遷移、平滑肌細胞收縮及細胞凋亡。目前許多研究表明[2]，ROCK信號通路與動脈粥樣硬化性心血管疾病的發生與發展有著密切的關系，ROCK活性水平可作為心血管事件獨立預測因子，對ACS患者的病情預測及康復干預有重要的臨床意義。

本研究試驗發現急性冠脈綜合征各組患者血漿中ROCK1和ROCK2水平均高于對照組，差異有統計學意義(P<0.01)，其中AMI組ROCK1、ROCK2高于UA組，ROCK2表現更明顯，差異有統計學意義(P<0.01)。在ROCK水平與冠脈病變程度的關系研究中顯示，三支病變組的ROCK1、ROCK2水平高于雙支和單支病變組，差異有統計學意義(P<0.01)，雙支病變組與單支病變組對比未見明顯統計差異；Gensini評分≥2O分組高于Gensini評分<20分組，其中ROCK1更加明顯，差異有統計學意義(P<0.01)。提示ROCK水平在急性冠脈綜合征患者中表達增加可能與心肌損傷范圍、易損斑塊進展以及炎癥反應的程度有關，冠狀動脈病變程度越嚴重，血漿中ROCK1、ROCK2水平明顯升高。

ROCK具有非特異性，在急性腦梗死、外傷性腦損傷、肺纖維化、惡性腫瘤等非心血管疾病均可有異常升高情況[3-4]，臨床觀察病情時候需要鑒別。ACS各組患者血漿中ROCK水平顯著升高，考慮與以下幾個機制有關：①急性冠脈事件中，內皮損傷和功能障礙:內皮源性一氧化氮合成酶(eNOS)功能下降，不能維持血管正常生理功能。研究證實[5]，ROCK通過改變eNOSmRNA的穩定性，負性調節eNOS的表達；同時通過抑制PI3K/Akt的激活及eNOS Ser1177的磷酸化降低eNOS活性。②炎性反應在ACS的發生關鍵因素表現為炎性細胞向內膜的浸潤，形成內膜下早期炎性滲出物。斑塊中的炎性物質被激活后，Rho激酶通過誘導單核細胞趨化蛋白表達參與單核細胞向內皮細胞的遷移，調控巨噬細胞吞噬功能和增加內皮細胞的通透性[6]，促進斑塊的不穩定，推動ACS的進展。③凝血酶激活，并在級聯放大反應中誘導血小板聚集和組織因子的表達，促進血栓形成。Masato E等研究發現，凝血酶是經Rho/Rho激酶途徑誘導組織因子表達，Rho激酶特異性抑制劑可以抑制組織因子的表達[7]。④冠狀動脈痙攣是ACS的一個重要因素，由平滑肌細胞收縮反應急劇升高引起。ROCK具有通過磷酸化MLC以及抑制MLC磷酸酶，從而增強MLC的磷酸化作用，促進平滑肌細胞過度收縮，誘發冠狀動脈痙攣。另外，心肌缺血-再灌注損傷可引起Rho激酶、Jun N末端激酶(JNK)和凋亡誘導因子(AIF)活性顯著增強，ROCK通過上調Bax以激活線粒體死亡通路，進而誘導心肌細胞凋亡。ATP競爭性的ROCK抑制劑Y-27632可通過抑制Rho激酶活性保護心肌損傷，Rho激酶可作為治療急性冠脈綜合征一個新的重要靶點[8]。

本研究觀察發現各組ACS患者血漿ROCK1、ROCK2和ROCK水平顯著升高，提示可以通過檢測用來預測病情和評估臨床療效。但是本研究樣本量較少，研究時間偏短，同時相關指標檢測受發病時間、心肌損傷程度影響，下一步需要通過加大樣本量、延長觀察時間、必要時動態觀察ROCK水平的變化。