雞菌菌絲體固體培養基配方的優化

張明星 李 潔 張玄妮 李歡歡 謝 娟 徐學鋒

（華南農業大學食品學院，廣東廣州 510642）

1 材料與方法

1.1 試驗材料

（2）培養基原材料與儀器

培養基原材料：牛肉膏、蛋白胨、酵母浸膏、麥芽浸提物、可溶性淀粉，廣東環凱微生物科技有限公司生產；硝酸銨、磷酸二氫鉀和硫酸鎂，廣東光華化學廠有限公司生產；葡萄糖、硫酸銅、氫氧化鈉、氯化鉀，天津福晨化學試劑廠生產；麥芽糖、乳糖、蔗糖，天津福宇精細化工有限公司生產；顆粒直徑為0.075 mm的膨化豆粕，益海（連云港）糧油工業有限公司生產；顆粒直徑為0.075 mm的小麥麩皮，益海嘉里（鄭州）食品工業有限公司生產。

儀器：HVE-50型全自動高壓滅菌鍋，日本Hi?rayama公司；雷磁pHs-25型數顯pH計，上海偉業儀器廠；SW-CJ-1F超凈工作臺，江蘇蘇州安泰空氣技術有限公司；TG-16W臺式高速離心機，長沙湘智離心機儀器有限公司；FSH-2A可調高速均質機，常州市國旺儀器制造有限公司；101AS-3電熱鼓風干燥箱，上海浦東躍東欣科學儀器廠；LRH-250A型生化培養箱，廣東省醫療器械廠；SPH-2102C立式恒溫培養振蕩器，上海四平試驗設備有限公司。

（3）供試培養基及制備方法

基礎培養基：200.0 g土豆熬汁過濾后加葡萄糖20.0 g，瓊脂20.0 g，蒸餾水定容至1 L，自然pH。

改良PD（Potato Dextrose）培養基：于1 L的PD培養基中加入硫酸鎂1.0 g，磷酸二氫鉀1.0 g，自然pH。改良PDA培養基：于改良PD培養基中加入瓊脂20.0 g。

圖1 雞菌的生長特性（雞菌菌絲的鏡檢觀察均在40倍物鏡下）

1.2 試驗方法

1.2.1 單因素試驗

培養溫度試驗：向改良PDA平板（直徑9 mm）培養基接入直徑2 mm雞菌菌絲塊，于22℃、25℃、28℃、31℃、34℃暗培養。觀察不同培養溫度雞菌菌絲生長情況。每個處理設3個重復。

初始pH試驗：以改良PDA平板培養基為pH試驗的基礎培養基，用1%NaOH和1%HCl調節培養基pH為4、5、6、7、8、9。其他操作同溫度試驗，培養溫度28℃。觀察不同pH條件下的雞菌菌絲生長情況。每個處理設3個重復。

氮源試驗：以20 g葡萄糖，20 g瓊脂為基礎分別加入供試氮源。氮源添加量（g/L）分別為酵母浸膏3.0、蛋白胨3.0、硝酸銨3.0、牛肉膏3.0、膨化豆粕5.0、麥芽浸汁2.0。其他操作同溫度試驗，培養溫度28℃。觀察不同氮源對雞菌菌絲生長的影響。每個處理設3個重復。

碳源試驗：以20 g瓊脂為基礎分別加入質量濃度為2 g/L的供試碳源。碳源分別為葡萄糖、乳糖、麩皮、淀粉、蔗糖，麥芽糖。其他操作同溫度試驗，培養溫度28℃。觀察不同碳源對雞菌菌絲生長的影響。每個處理設3個重復。

礦物質試驗：向基礎培養基PDA中分別加入 硫 酸 鎂 0、0.5 g/L、1.0 g/L、1.5 g/L、2.0 g/L、2.5 g/L、3.0 g/L、3.5 g/L；磷 酸 二 氫 鉀0、0.5 g/L、1.0 g/L、1.5 g/L、2.0 g/L、2.5 g/L、3.0 g/L、3.5 g/L；硫酸銅 0、0.015 g/L、0.030 g/L、0.045 g/L、0.060 g/L、0.075 g/L（硫酸銅溶液要單獨滅菌后加入）。其他操作同溫度試驗，培養溫度28℃。每個處理設3個重復。

1.2.2 最優組合篩選

從接種第5天開始采用十字交叉法測量菌絲生長量，每隔5 d測一次，計算菌絲生長速度，連續測量30 d。計算菌絲平均生長速度，并觀察記錄菌絲長勢。

1.3 數據分析

試驗數據采用新復極差法對各試驗處理進行差異顯著性檢驗。

2 結果與分析

2.1 培養溫度對雞菌菌絲生長的影響

表1 培養溫度對雞菌菌絲生長的影響

表1 培養溫度對雞菌菌絲生長的影響

注：數據為三次重復平均值。相同字母表示差異不顯著（P＞0.05）。下同。

菌絲平均長速/（mm·d-1）1.09 1.24 1.37 1.23 0.00菌絲長勢菌絲稀菌絲較密菌絲較密較稀不長溫度/℃22 25 28 31 34差異顯著性b c d c a

2.2 p H對雞菌菌絲生長的影響

表2 初始p H對雞菌菌絲生長的影響

表2 初始p H對雞菌菌絲生長的影響

pH 4 5 6 7 8 9菌絲平均長速/（mm·d-1）1.31 1.21 1.20 1.17 1.14 1.07差異顯著性b ab ab ab ab a菌絲長勢菌絲較密菌絲稀較稀較稀較稀較稀

2.3 硫酸鎂對雞菌菌絲生長的影響

2.4 磷酸二氫鉀對雞菌菌絲生長的影響

表3 硫酸鎂對雞菌菌絲生長的影響

表3 硫酸鎂對雞菌菌絲生長的影響

硫酸鎂/（g·L-1）0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5菌絲平均長速/（mm·d-1）1.11 1.09 1.23 1.26 1.38 1.52 1.24 1.09差異顯著性a a b b c d b a菌絲長勢較稀菌絲稀菌絲稀較稀菌絲稀菌絲稀菌絲較密較稀

表4 磷酸二氫鉀對雞菌菌絲生長的影響

表4 磷酸二氫鉀對雞菌菌絲生長的影響

磷酸二氫鉀/（g·L-1）0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5菌絲平均長速/（mm·d-1）1.14 1.22 1.23 1.26 1.29 1.36 1.34 1.37差異顯著性a ab ab ab ab b b b菌絲長勢較稀菌絲稀菌絲較密菌絲稀菌絲茂密菌絲較密菌絲較密菌絲較密

2.5 硫酸銅對雞菌菌絲生長的影響

表5 硫酸銅對雞菌菌絲生長的影響

表5 硫酸銅對雞菌菌絲生長的影響

硫酸銅/（g·L-1）0 0.015 0.030 0.045 0.060 0.075菌絲平均長速/（mm·d-1）1.23 1.06 0.96 0.90 0.82 0.85差異顯著性c b a b a a a菌絲長勢菌絲較密菌絲稀菌絲稀較稀較稀較稀

2.6 供試碳源對雞菌菌絲生長的影響

表6 供試碳源對雞菌菌絲生長的影響

表6 供試碳源對雞菌菌絲生長的影響

碳源乳糖麩皮蔗糖麥芽糖葡萄糖淀粉菌絲平均長速/（mm·d-1）0.33 0.70 1.23 1.42 1.24 1.66差異顯著性a b c d c e菌絲長勢向上堆積較稀菌絲稀菌絲較密菌絲較密菌絲較密

2.7 供試氮源對雞菌菌絲生長的影響

表7 供試氮源對雞菌菌絲生長的影響

表7 供試氮源對雞菌菌絲生長的影響

氮源硝酸銨蛋白胨牛肉膏酵母浸膏麥芽浸汁膨化豆粕菌絲平均長速/（mm·d-1）1.08 1.33 1.24 1.46 1.22 1.18差異顯著性a cd bc d bc ab菌絲長勢較稀菌絲較密菌絲較密菌絲茂密菌絲稀菌絲較密

2.8 組合試驗結果

3 小結

真菌菌絲的生長速度受到培養方式及培養基質的影響，借鑒前人的研究方法對雞菌菌絲固體培養基進行優化。優化后的培養基培養雞菌菌絲，菌絲平均長速達1.41 mm/d。筆者在試驗過程中發現，雞菌菌株活性受保存溫度及培養基影響較大，因此對該菌種保藏要額外注意，保存方法可參考馬濤等[13]的研究結果。

表8 雞菌菌絲生長的固體基質最優組合

表8 雞菌菌絲生長的固體基質最優組合

試驗號1 2 3 4 5 6 7 8 9氮源酵母膏酵母膏酵母膏蛋白胨蛋白胨蛋白胨牛肉膏牛肉膏牛肉膏碳源淀粉麥芽糖葡萄糖淀粉麥芽糖葡萄糖淀粉麥芽糖葡萄糖硫酸鎂/（g·L-1）2.0 2.5 3.0 2.5 3.0 2.0 3.0 2.0 2.5菌絲平均長速/（mm·d-1）1.13b 1.31 bcd 1.28 bcd 0.86 a 1.18 bc 1.41 d 1.14 b 1.24 bcd 1.38 cd