一株袋栽食用菌的形態和分子鑒定

叢倩倩 孔 怡 安秀榮

（泰安市農業科學研究院，山東泰安 271000）

傳統的食用菌分類和鑒定方法主要是基于子實體的形態特征和微觀結構。但是這種分類和鑒定方法在鑒定一些較為相似的種時會比較困難，甚至會出現一些錯誤，同時也阻礙了科學研究的進程和食用菌的進一步開發利用[1]。

筆者在進行靈芝產業調研時，發現了一株袋栽食用菌，其子實體無明顯菌柄，菌蓋乳白色、扇形，近基部有不明顯的瘤狀突起，當地稱之為“白靈芝”。為了明確該“白靈芝”的種屬，采取分子生物學結合形態學方法，對其分類地位進行初步鑒定，以便為其進一步的開發利用提供依據。

1 材料與方法

1.1 供試材料

樣品采自于山東省聊城市冠縣芝藝緣靈芝專業合作社，為大棚墻式立體栽培的子實體。

1.2 試驗方法

1.2.1 子實體的形態鑒定

肉眼觀察該菌株的子實體形態，分別用解剖鏡、顯微鏡觀察菌管的形狀和孢子的形態，然后參照卯曉嵐［2］的方法初步分類鑒定。

1.2.2 ITS分子鑒定

子實體組織分離培養長出菌絲后，挑取尖端菌絲置空白PDA培養基上繼續培養。重復以上操作3次后即可得到純培養物（菌絲），保存于4℃冰箱備用。

首先用真菌DNA提取試劑盒（天根生化科技有限公司）提取菌絲DNA，然后用真菌通用引物ITS1/ITS4進行PCR擴增，PCR反應程序為：94℃預變性5 min；94℃變性30 s，55℃退火45 s，72℃延伸1 min，30個循環；72℃后延伸10 min。在凝膠成像系統中觀察經瓊脂糖凝膠電泳后的PCR產物，選擇600~700 bp的條帶進行切膠回收，回收產物送上海生工生物工程有限公司測序，測序結果輸入Gen?Bank數據庫進行BLAST比對分析，查找與其同源性最高的序列。

2 結果與分析

2.1 形態學鑒定結果

該菌株子實體中等或大，白色、乳白色或淺灰白色。菌蓋（10~18）cm×（8~10）cm，厚1~2 cm，半圓形、扇形或貝形，木栓質，無菌柄，表面有微細絨毛漸變光滑，有小瘤狀凸起，邊緣鈍圓、波狀或瓣裂，菌肉白色（圖1）。菌管蜂窩狀、圓形，每毫米約3個（圖2）；孢子無色、光滑，寬橢圓形，（4.5~5）μm×（2.5~3.0）μm（圖3）。

查閱文獻并從其形態學特征，初步鑒定該菌株為多孔菌科栓孔菌屬的乳白栓孔菌。

2.2 ITS序列分析

該菌株的ITS核酸序列見圖4，PCR擴增產物長度共611 bp。將測序獲得的ITS序列輸入GenBank核酸數據庫進行BLAST比對，發現該菌株與登錄號為MT611189.1的Leiotrametes lactinea同源性為99.84%。綜合形態特征和分子生物學鑒定結果，確定該袋栽菌株為乳白栓孔菌（Leiotrameteslactinea）。

圖2 菌管的形態

圖3 孢子

圖4 ITS區域核苷酸序列

3 小結與討論

食用菌生長易受外界環境條件、分布地域等因素的影響，同一菌株在不同的地區會表現出形態的多樣性。筆者分離純化該乳白栓孔菌菌株后進行栽培，結果發現該菌株形態特征發生了明顯的變化，菌蓋表面有明顯的瘤狀凸起和不明顯的棱紋，邊緣瓣裂，菌肉白色（圖5）。此外，即使是不同菌株，有些也擁有相似的形態學和顯微學特征。因此單純依靠形態學特征對菌株進行鑒定和分類往往會出現一定的偏差。

圖5 栽培的乳白栓孔菌的子實體形態

“白靈芝”又名“玉芝”，對心血管疾病有特效，具有祛風除濕、止血、化痰、抗癌、提高免疫力及滋補強身等功效。研究從形態學和分子生物學對一株被稱之為“白靈芝”的袋栽菌株進行分類鑒定，最終將其鑒定為乳白栓孔菌（Leiotrameteslactinea），還該菌株本來面目，糾正了對該菌株的錯誤命名。

目前，國內外對乳白栓孔菌的研究較少[3]，研究為進一步開發該菌株奠定了基礎。