川崎病小鼠模型心功能演變過(guò)程研究

婁萍，焦富勇，張雪梅，張丹，趙穎，趙欣，王俊香，金晶，曹玲

川崎病（Kawasaki disease，KD）又稱為小兒皮膚黏膜淋巴結(jié)綜合征，是一種以全身中小動(dòng)脈炎癥病變?yōu)橹饕卣鞯募毙悦庖呦到y(tǒng)疾病［1］，其病因不明。相關(guān)研究表明，KD可能與感染、遺傳和超抗原因素有關(guān)［2-3］。KD好發(fā)于5歲以下兒童，其可導(dǎo)致患兒發(fā)生嚴(yán)重心血管病變，以冠狀動(dòng)脈損傷最為嚴(yán)重，包括冠狀動(dòng)脈擴(kuò)張和冠狀動(dòng)脈瘤形成，最終導(dǎo)致患兒心肌缺血、心肌梗死等，目前其已取代風(fēng)濕熱而成為我國(guó)小兒后天性心臟病的主要病因之一［4］。本研究通過(guò)干酪乳桿菌細(xì)胞壁成分（lactobacillus casei cell wall extract，LCWE）誘導(dǎo)小鼠KD模型，并觀察其心功能的演變過(guò)程，旨在探討KD對(duì)心功能的影響。

1 材料和方法

1.1 LCWE制備 本實(shí)驗(yàn)時(shí)間為2020年1月。將干酪乳桿菌（貝納細(xì)胞生物保存管理中心，第134415號(hào)）培養(yǎng)于乳酸菌肉湯培養(yǎng)基中24 h，在對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期收集細(xì)菌，添加4% SDS裂解，4 000 r/min離心30 min（離心半徑8 cm），使用磷酸緩沖鹽溶液（phosphate buffer saline，PBS）反復(fù)沖洗，加入250 μg/ml RNase、DNase和胰蛋白酶，在37 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4 h，使用PBS再次清洗后收集細(xì)菌碎片，并取1 g濕重加入5 ml PBS，冰浴，使用超聲細(xì)胞破碎儀處理2 h（超聲5 s、間隙5 s，功率300 W），將處理后的溶液離心1 h（4 ℃，15 600 r/min、離心半徑8 cm），配置成LCWE的終液。

1.2 動(dòng)物制備 隨機(jī)選擇50只BALB/c小鼠〔北京維頓利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司,生產(chǎn)許可證SCXK（北京）2016-0006，銷(xiāo)售許可證SYXK（陜西）2012-005〕，體質(zhì)量（17.0±0.5）g,無(wú)特定病原體，將其分成模型組30只和對(duì)照組20只，并分別編寫(xiě)序號(hào)。模型組小鼠經(jīng)腹腔注射LCWE的終液，單次注射0.5 ml；對(duì)照組小鼠不做任何處理。

1.3 方法 檢測(cè)對(duì)照組及模型組小鼠建模后2 d、15 d、30 d心功能指標(biāo)，具體如下：將小鼠胸口毛脫掉，放入密封盒中，吸入異氟烷將其麻醉，仰臥位固定在檢查臺(tái)上，同步記錄小鼠心率。……