EDTA-K2抗凝血漿與血清中心臟標志物檢測結果的一致性驗證

楊郝亮，張 萍，武利濤，周航宇，郝金莉，王 昊，丁 然，陳維華，楊曦明△

1.北京中醫藥大學東直門醫院檢驗科，北京 100700；2.北京市通州區疾病預防控制中心中心實驗室，北京 101100

隨著社會經濟的發展，人們生活方式發生了巨大變化，尤其是人口老齡化及城鎮化進程加速，中國心血管疾病危險因素流行趨勢明顯，如吸煙、高血壓、血脂異常、糖尿病、超重/肥胖、缺乏運動和不合理膳食等，導致心血管疾病的發病人數持續增加[1-3]。今后10年，心血管疾病患病人數仍將快速增長。急性心肌梗死(AMI)是冠狀動脈急性、持續性缺血缺氧引起的心肌壞死，作為一種心血管危急癥，其具有發病急、病死率高、最佳救治窗口期短且容易合并多器官系統疾病等特點[4-5]。2002-2016年，AMI病死率總體仍呈上升態勢，從2005年開始，AMI病死率呈快速上升趨勢。肌紅蛋白(Myo)、肌鈣蛋白I(cTnI)和肌酸激酶同工酶(CK-MB)對AMI的早期診斷有重要作用，可為臨床提供診斷依據，從而降低AMI急性期的病死率[6-9]。在實際應用過程中，推薦使用的血清標本因分離時間長對報告的及時性可造成一定影響，而使用血漿可以縮短標本預處理時間。本研究對乙二胺四乙酸二鉀(EDTA-K2)抗凝血漿和血清對心臟標志物檢測結果的一致性進行初步驗證，現報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取北京中醫藥大學東直門醫院因急性冠狀動脈綜合征入院的患者133例作為研究對象。選取CK-MB、Myo和cTnI正常參考值人群標本、異常人群標本2個梯度，其中每個梯度各40例，男女各20例。

1.2儀器與試劑 亞輝龍iFlash 3000-H化學發光測定儀及配套CK-MB、Myo及cTnI原裝試劑、校準品及質控物。CK-MB參考值為：男性<5.60 ng/mL，女性<3.10 ng/mL；Myo參考值為：男性<118.0 ng/mL，女性<59.5 ng/mL；cTnI參考值為：<0.03 ng/mL。真空采血管為北京格瑞納健峰生物技術有限公司提供的奧地利非可替紫頭管(內含EDTA-K2，批號：454222)和紅頭管(內含分離膠，批號：454067)。

1.3方法 分別用紅頭管和紫頭管采集同一患者靜脈血，紅頭管為血清組，紫頭管為血漿組，分別于低速離心機4 000 r/min離心10 min(排除高脂血、溶血、高膽紅素血標本)，采用直接化學發光技術的夾心免疫法測定CK-MB、Myo和cTnI水平，抽血后4 h內完成全部項目的檢測。所有檢測項目均按試劑盒說明書設定參數，采用試劑配套校準品進行校準，確認質控結果在控后，同時對兩種標本進行檢測。

2 結 果

2.1CK-MB、Myo和cTnI檢測結果陰性、陽性一致性評價 CK-MB、Myo和cTnI定性分析結果存在一致性，Kappa值為0.75～1.00，一致性較好。其中CK-MB和cTnI檢測結果的Kappa值一致性檢驗完全相符，在標本前處理過程中，抽取血漿或血清對CK-MB和cTnI檢測定性結果無影響。Myo檢測結果Kappa值一致性檢驗不完全相符。血清組中有2例Myo陽性患者在血漿組中檢測結果為陰性，這2例血清陽性值在參考區間的臨界值附近。Myo血清組與血漿組經一致性檢驗Kappa值為0.95，一致性較好。血清和血漿CK-MB、Myo和cTnI檢測結果陰性、陽性一致性評價見表1。

表1 3項指標檢測結果陰性、陽性一致性評價

2.2血清組與血漿組CK-MB、Myo和cTnI檢測結果比較 EDTA-K2抗凝血漿組與血清組CK-MB、Myo和cTnI檢測結果的數據分布均呈偏態分布，Myo偏態分布數據取以10為底的對數后轉換為正態分布。血漿組和血清組CK-MB和Myo檢測結果比較，差異均有統計學意義(P<0.05)；血漿組和血清組cTnI檢測結果比較，差異無統計學意義(P>0.05)。見表2。

表2 血清組與血漿組CK-MB、Myo和cTnI檢測結果比較(ng/mL)

2.3血清組與血漿組CK-MB陽性者和陰性者CK-MB檢測結果比較 血清組與血漿組CK-MB陽性者和陰性者CK-MB檢測結果比較，差異均有統計學意義(P<0.05)，見表3。

表3 血清組與血漿組CK-MB陽性者和陰性者CK-MB檢測結果比較[M(P25～P75)，ng/mL]

2.4血漿組和血清組Myo陽性者和陰性者Myo檢測結果比較 血漿組和血清組Myo陽性者Myo檢測結果比較，差異無統計學意義(P>0.05)；血漿組和血清組Myo陰性者Myo檢測結果比較，差異有統計學意義(P<0.05)。見表4。

表4 血漿組和血清組Myo陽性者和陰性者Myo檢測結果比較[M(P25～P75)，ng/mL]

2.5血漿組和血清組cTnI陽性者和陰性者cTnI檢測結果比較 血漿組和血清組cTnI陽性者和陰性者cTnI檢測結果比較，差異均無統計學意義(P>0.05)，見表5。

表5 血漿組和血清組cTnI陽性者和陰性者cTnI檢測結果比較[M(P25～P75)，ng/mL]

3 討 論

據流行病學調查顯示,近年來我國心血管疾病持續增加,老齡心血管疾病患者數量大幅增多[10]，其中AMI患者需要早期診斷，以便及時采取治療措施，挽救生命。使用抗凝管獲取血漿可避開血液凝固的過程，可以盡快對標本進行分離、檢測，從而縮短檢測時間。應注意各種抗凝劑(如肝素或EDTA-K2等)對不同檢測方法的影響程度不一。檢測心肌損傷標志物時使用血漿可以縮短標本周轉時間，但是一定要考慮抗凝劑對檢測結果的影響。EDTA-K2抗凝血漿和血清標本均為亞輝龍公司認可的心肌損傷標志物標本類型，但這兩種標本類型的檢測結果是否一致需進行驗證。

本研究結果表明，EDTA-K2抗凝血漿和血清的心肌損傷標志物定性分析結果一致性較好。CK-MB和cTnI檢測結果Kappa一致性檢驗完全相符，表明血漿中的纖維蛋白原和EDTA-K2抗凝劑對CK-MB和cTnI定性分析無非特異性干擾。Myo檢測結果Kappa一致性檢驗不完全相符，Myo在血清組中有2例陽性，在血漿組中按現有的參考值判為陰性，這2例血清陽性值在參考區間臨界值附近。Myo作為急性冠狀動脈綜合征患者心肌損傷的早期標志物，其參考區間在EDTA-K2抗凝血漿中需要根據實驗室具體情況來建立。

本研究EDTA-K2抗凝血漿和血清的心肌損傷標志物定量分析結果表明，cTnI作為最特異的心肌標志物[11-12]，EDTA-K2抗凝血漿組和血清組檢測結果差異無統計學意義(P>0.05)。Myo和CK-MB則因試管而異，EDTA-K2抗凝血漿組和血清組檢測結果差異有統計學意義(P<0.05)。與血清組比較，血漿組Myo和CK-MB檢測結果偏低，這與國內外相關報道結果一致[13-14]。國外文獻報道，分離膠干擾Myo和CK-MB檢測機制尚不清楚[14]。從凝膠中釋放出的未知物質可以輕微影響化學發光信號產生，也可以影響檢測中使用的抗體與Myo或CK-MB之間的相互作用。有文獻報道，抗凝劑不同對檢測結果有影響[14]。DAVES等[14]研究發現，使用Beckman Coulter Access時，含分離膠血清管的CK-MB檢測結果比不含分離膠肝素鋰抗凝管高，但HEDBERG等[15]觀察到Abbott AxSYM檢測肝素鋰血漿CK-MB檢測結果比血清高。抗凝劑與分離膠對心肌損傷標志物檢測結果的影響有待進一步研究。各實驗室在使用各檢測系統前需對廠家聲明進行驗證，并制訂各自實驗室的參考區間。

綜上所述，EDTA-K2抗凝血漿可作為血清替代標本檢測cTnI，但不適合作為血清替代標本檢測Myo和CK-MB。如在工作中需要使用EDTA-K2抗凝血漿，則需要實驗室根據具體情況建立相應的Myo和CK-MB參考區間。