HB&L微生物培養儀在尿路感染中的臨床診斷價值*

丁賠賠，李艷君，丁毅偉，錢揚會，趙強元

中國人民解放軍總醫院第六醫學中心檢驗科，北京 100048

尿路感染(UTI)是一種常見的感染性疾病，有資料顯示，全球每年新增UTI患者大約1.5億，而中國UTI感染率達1%，其中絕大部分患者為成年女性[1-2]。如不及時治療UTI常常會導致慢性感染，嚴重者可能會導致腎功能受損，嚴重影響患者的生命安全[3-4]。目前，臨床上診斷UTI的金標準是尿培養，然而尿培養過程復雜，從標本采集到鑒定出結果耗時較長，并且大部分送檢標本培養結果為陰性，浪費大量的人力、物力[5]。隨著現代化科技的飛速發展，臨床檢驗技術也在不斷更新，正向著自動化、快速、準確的方向發展。因此，尋找一種省時且準確率高的篩檢方法，對于臨床診斷UTI有十分重要的意義。KROUMOVA等[6]研究表明，質譜分析前采用HB&L增菌技術將樣品富集到生長培養基中，能夠快速鑒定生長菌落中的細菌。然而，HB&L增菌技術在UTI菌種鑒定中的應用價值目前尚鮮有報道?；诖?，本研究通過比較分析尿培養與HB&L微生物培養儀增菌后質譜的菌種鑒定結果，以期探討HB&L微生物培養儀在UTI臨床診斷中的價值，現報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 收集2019年6-12月于本院就診的277例疑似UTI患者作為研究對象，其中男158例，女119例。納入標準：患者均具有尿路刺激癥狀，如尿頻、尿急、尿痛、發熱或腎區疼痛等。排除標準：(1)檢測前服用皮質激素或其他抗菌藥物的患者；(2)合并人類免疫缺陷病毒(HIV)感染等傳染性疾病患者；(3)合并其他對結果有影響疾病的患者。

1.2研究方法

1.2.1標本采集與保存 患者入院后，按照《全國臨床檢驗操作規程》[7]采集清潔尿液標本(包括中段尿、尿袋引流尿、膀胱穿刺尿)，立即送檢。

1.2.2尿培養方法 取10 μL尿液定量接種到哥倫比亞血平板和麥康凱培養皿平板，置于35 ℃ 5%～10%CO2培養箱中培養24～48 h，取出培養皿，進行菌落計數，并記錄培養結果。判斷標準：(1)陽性為革蘭陽性菌>104cfu/mL，革蘭陰性菌>105cfu/mL；(2)陰性為48 h無菌落生長或菌落計數<104cfu/mL。針對陽性結果進行如下處理：取單個菌落涂于質譜儀靶板，加甲酸，風干，加基質，風干，然后上質譜儀鑒定，對所有陽性菌株進一步鑒定到種。

1.2.3HB&L微生物培養儀培養方法 取500 μL尿液接種到尿培養增菌液瓶中，放在HB&L微生物培養儀中培養3 h 15 min，根據HB&L微生物培養儀結果處理培養液。判斷標準：(1)陰性直接報陰性。(2)陽性結果，取出1 mL培養液放入無菌EP管內，在離心機上(15 000 r/min)離心2 min，棄上清液；加入1 mL注射用水混勻，15 000 r/min離心機上離心2 min，棄上清液；取沉淀進行涂片革蘭染色鏡檢；如果是兩種或兩種以上細菌形態直接報實際的細菌形態及菌落計數，如果是單一細菌形態，取沉淀物涂在質譜儀靶板上，風干，加甲酸，風干，加基質，風干，然后上質譜儀鑒定。記錄具體細菌名稱和菌落計數。所有細菌在進行質譜儀鑒定時均要同時進行質控菌株鑒定。

1.2.4質控菌株 金黃色葡萄球菌ATCC25923、大腸埃希菌ATCC25922。

1.3統計學處理 采用SPSS20.0統計軟件進行數據分析處理。采用Kolmogorov-Smirnov對數據進行正態性檢驗，不符合正態分布的計量資料以M(P25～P75)表示，組間比較采用Wilcoxon秩和檢驗；計數資料以例數或百分率表示，組間比較采用χ2檢驗。以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1尿培養與HB&L微生物培養儀培養時間比較 HB&L微生物培養儀培養時間[3.25(3.25～3.25)h]與尿培養時間[48.00(48.00～48.00)h]比較，差異有統計學意義(P<0.05)。

2.2尿培養與HB&L微生物培養儀陽性檢出率比較 277例尿液標本中，尿培養陽性檢出率(23.47%，65/277)與HB&L微生物培養儀陽性檢出率(23.10%，64/277)比較，差異無統計學意義(χ2=0.010，P>0.05)。以尿培養結果作為金標準，277例尿液標本中，HB&L微生物培養儀的靈敏度為96.92%，特異度為99.53%，準確度為99.28%，陽性預測值為98.44%，陰性預測值為99.06 %，見表1。

表1 尿培養與HB&L微生物培養儀陽性檢出結果比較(n)

2.3UTI患者病原菌分布情況 277例尿液標本中，單一菌感染55例，混合菌感染10例，采用HB&L微生物培養儀鑒定菌種的檢出率為90.67%(68/75)，錯誤率為1.33%(1/75)，未檢出率為8.00%(6/75)。革蘭陰性菌檢出率為95.65%(44/46)，錯誤率為0.00%(0/46)，未檢出率為4.35%(2/46)；革蘭陽性菌檢出率為78.57%(11/14)，錯誤率為7.14%(1/14)，未檢出率為14.28%(2/14)；真菌檢出率為86.87%(13/15)，錯誤率為0.00%(0/15)，未檢出率為13.33%(2/15)。見表2。

表2 UTI陽性患者病原菌分布情況

續表2 UTI陽性患者病原菌分布情況

3 討 論

UTI是一種由各種病原體、真菌等侵犯尿路黏膜或組織引起的尿路炎癥疾病，其臨床癥狀為尿頻、尿急、尿痛等。若不及時治療，則可能引發糖尿病、尿毒癥及腎衰竭等疾病，甚至可能危及患者生命[8-9]。因此，早期檢測并及時治療UTI，對改善患者病情十分必要。目前，尿常規檢查是診斷UTI最可靠的方法，其金標準為定量尿培養，但臨床有研究顯示，尿培養耗時較長，常超過2 d，且陽性率低[10]。因此，臨床上若出現UTI癥狀時，醫生通常會經驗性使用抗菌藥物，一方面可能導致抗菌藥物濫用，另一方面也可能導致耐藥性尿路感染菌出現[5]。因此，繼續尋找快速、準確的UTI檢測方法，對于幫助醫生快速排除UTI及根據檢測結果合理用藥十分必要。

HB&L微生物培養儀是一種快速、自動化的尿液和生物樣品細菌篩查儀器，使用光散射技術檢測細菌生長。有研究表明，尿液快速篩查系統中用于增菌的HB&L體液培養基適合于所有人體體液培養及血培養，并且能夠培養較難培養的細菌[11]。FONTANA等[12]研究表明，采用HB&L UROQUATTROTM系統可以明顯縮短診斷時間?？稍? h內得出血流感染的陰性診斷，并可在22～28 h內得出陽性診斷，明顯提高血流感染的診斷率。本研究結果顯示，HB&L微生物培養儀檢測時間明顯短于尿培養，提示HB&L微生物培養儀能夠有效縮短培養時間。

PICCINELLI等[13]對血液透析用水和胃腸道內窺鏡進行微生物檢測，結果表明，HB<M系統具有較高的特異性，且使用傳統培養方法從陽性培養物中鑒定出的分離株與通過Uro4 HB<M系統鑒定出的分離株相同。CAMPOSAMPIERO等[14]研究表明，HB&L微生物培養儀檢測眼角膜保存液中微生物的靈敏度為95.5%，特異度為99.8%，陽性預測值為90.1%，陰性預測值為99.9%。本研究結果顯示，277例患者尿液標本中尿培養陽性檢出率(23.47%)與HB&L微生物培養儀陽性檢出率(23.10%)比較，差異無統計學意義(P>0.05)，且HB&L微生物培養儀檢測UTI的靈敏度為96.92%，特異度為99.53%，準確度為99.28%，陽性預測值為98.44%，陰性預測值為99.06%，與CAMPOSAMPIERO等[14]研究結果大致相同。由此提示HB&L微生物培養儀對于診斷UTI具有重要應用價值。

本研究進一步分析菌種鑒定情況，結果顯示，277例尿液標本中，單一菌感染55例，混合菌感染10例，HB&L微生物培養儀可能對于混合菌檢測的準確度較低。ALTUN等[15]通過分析FilmArray血培養在無菌體液中快速鑒定微生物的臨床表現，結果表明，單一微生物標本準確鑒定率為100%(84/84)，多微生物樣品準確鑒定率為75%(18/24)。由此提示采用HB&L增菌技術培養后，可能受不同菌株生長情況的影響，存在部分弱勢菌株，在短期增菌后菌株生長量未達到質譜檢測的最低檢出限，使部分菌株未被檢測出。本研究結果顯示，采用HB&L增菌后質譜鑒定菌種的總體檢出率為90.67%(68/75)，提示HB&L微生物培養儀結果的總體檢出率較高，可以作為一種快速、準確診斷UTI的新方法。

綜上所述，HB&L微生物培養儀可大幅度縮短培養時間，菌株檢出率高，為UTI的診斷和給出合理用藥方案贏得了寶貴時間。然而，本研究標本容量較小，部分菌株數量較少，檢測結果可能存在一定誤差，下一步將擴大標本容量，并將其與藥敏試驗相結合，進行大規模臨床研究。