上皮性卵巢癌組織中TGF-β1和MDR1表達(dá)與患者臨床病理特征的關(guān)系*

喻朝霞，潘陶強(qiáng)，張?jiān)茦s，黃啟梅，馬俊，盧靜

(安慶市第一人民醫(yī)院 病理科，安徽 安慶 246000)

卵巢癌是臨床婦科常見的惡性腫瘤，其中85%～90%為上皮性卵巢癌，死亡率較高，上皮性卵巢癌的形成、轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)是多種環(huán)境因素及基因改變的共同結(jié)果[1-2]。組織轉(zhuǎn)化生長因子-β1(tyansfoyming growth β1，TGF-β1)為人體中主要的負(fù)性調(diào)控因子，可抑制多種細(xì)胞的活性、延緩細(xì)胞的生長，亦可參與免疫調(diào)節(jié)、胚胎發(fā)育、細(xì)胞凋亡等活動，在多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮著重要作用[3]；多藥耐藥基因1(multi-drug resistant 1，MDR1)則為耐藥相關(guān)基因，可促使腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生耐藥[4]。本研究通過免疫組化法檢測上皮性卵巢癌患者病理組織中TGF-β1與MDR1蛋白表達(dá)，分析上皮性卵巢癌組織中TGF-β1及MDR1蛋白表達(dá)與患者臨床病理特征的關(guān)系、并進(jìn)一步探討2種蛋白的相關(guān)性，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

1.1.1一般資料 選取2015年9月—2019年6月行手術(shù)治療的140例卵巢上皮石蠟包埋組織，患者年齡18～75歲，平均(46.87±7.43)歲。全部病例均為首次手術(shù)治療或追加手術(shù)治療，所用組織標(biāo)本均由病理專家閱片確診，并且臨床資料完整。排除轉(zhuǎn)移癌患者及術(shù)前放、化療患者，排除有其他合并癥的患者。140例患者中，其中56例上皮性卵巢癌患者(包括漿液性腫瘤、黏液性腫瘤與透明細(xì)胞瘤)作為上皮性卵巢癌組、50例良性上皮性卵巢腫瘤患者(包括多囊卵巢、黃體囊腫、卵巢纖維上皮瘤與成熟囊性畸胎瘤)作為卵巢良性腫瘤組、34例因良性子宮病變行卵巢切除的患者作為正常卵巢組。所有病例均經(jīng)手術(shù)和病理證實(shí)。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會審批通過。

1.1.2試劑 鼠抗人TGF-β1、MDR1單克隆抗體及免疫組織化學(xué)試劑盒均購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司(濃度為1 ∶100)。用已知陽性組織作為陽性對照，用PBS代替一抗作為陰性對照。

1.2 方法

采用免疫組織化學(xué)EnVision兩步法檢測卵巢上皮組織TGF-β1與MDR1表達(dá)[5]，取石蠟包埋的卵巢上皮組織，切片、脫蠟、水化、高壓抗原修復(fù)、封閉，按免疫組化試劑盒進(jìn)行操作，滴加一抗抗體，稀釋濃度為1 ∶100～1 ∶400，以PBS代替一抗作為陰性對照，滴加生物素標(biāo)記的二抗，PBS沖洗，DAB染色，于光學(xué)顯微鏡下觀察染色結(jié)果。染色判斷標(biāo)準(zhǔn)采用半定量計(jì)數(shù)法，按陽性細(xì)胞所占的百分比和著色強(qiáng)度進(jìn)行結(jié)果判定；陽性細(xì)胞數(shù)所占百分評分，陰性為0分、≤25%為1分、25%～50%為2分、50%～75%為3分、75%～100%為4 分；著色強(qiáng)度評分，無著色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分；以陽性細(xì)胞數(shù)百分比與著色強(qiáng)度評分的乘積作為總積分，0～1為陰性，≥2為陽性。

1.3 觀察指標(biāo)

比較3組被檢卵巢組織標(biāo)本中TGF-β1與MDR1表達(dá)，分析上皮性卵巢癌組織中TGF-β1、MDR1的表達(dá)與患者臨床病理特征的關(guān)系。采用Speaman相關(guān)性分析上皮性卵巢癌組織中TGF-β1與MDR1表達(dá)的相關(guān)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 21.0統(tǒng)計(jì)軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。計(jì)數(shù)資料以率(%)表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，相關(guān)性分析采用Spearman相關(guān)分析，以P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 TGF-β1及MDR1表達(dá)

結(jié)果顯示，3組卵巢組織中TGF-β1及MDR1陽性表達(dá)情況比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；上皮性卵巢癌組陽性表達(dá)率明顯高于卵巢良性腫瘤組及正常卵巢組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；卵巢良性腫瘤組與正常卵巢組比較，TGF-β1及MDR1陽性表達(dá)率均升高，MDR1差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)、而TGF-β1差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1、圖1。

表1 3組被檢卵巢組織中TGF-β1及MDR1表達(dá)[n(%)]

圖1 3組卵巢組織中TGF-β1、MDR1陽性表達(dá)(EnVision法，×100)

2.2 上皮性卵巢癌組織中TGF-β1、MDR1的表達(dá)與患者臨床病理特征的關(guān)系

結(jié)果顯示，上皮性卵巢癌患者病理分級為Ⅲ/Ⅳ級的TGF-β1、MDR1陽性表達(dá)率均高于Ⅰ/Ⅱ級，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的TGF-β1、MDR1陽性表達(dá)率高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；而TGF-β1、MDR1陽性表達(dá)率與患者年齡、組織類型無明顯關(guān)系(P>0.05)。見表2。

表2 上皮性卵巢癌組織中TGF-β1及MDR1表達(dá)與患者臨床病理特征的關(guān)系[n(%)]

2.3 上皮性卵巢癌組織TGF-β1與MDR1表達(dá)的相關(guān)性

Spearman相關(guān)分析結(jié)果顯示，上皮性卵巢癌組織TGF-β1與MDR1表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.608，P<0.001)。見表3。

表3 上皮性卵巢癌組織TGF-β1與MDR1表達(dá)的相關(guān)性[n(%)]

3 討論

卵巢癌因缺乏早期癥狀，臨床上尚無有效的早期診斷方法，臨床上約70%的患者確診時(shí)已為晚期，5年生存率僅為20%～30%；上皮性卵巢癌是卵巢癌的常見類型，其形成、轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)是多種環(huán)境因素及基因改變的共同結(jié)果[1-2]，積極探索上皮性卵巢癌發(fā)生發(fā)展、侵襲、轉(zhuǎn)移及耐藥成為目前的研究熱點(diǎn)[6-8]。

TGF-β1是TGF-β細(xì)胞因子超家族的成員，可通過刺激上皮性卵巢癌組織新生血管形成，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖、生長；協(xié)助癌細(xì)胞遷移，有利于癌細(xì)胞浸潤；抑制免疫，使上皮性卵巢癌細(xì)胞逃避免疫攻擊；上調(diào)細(xì)胞外基質(zhì)降解蛋白表達(dá)，促進(jìn)細(xì)胞外間質(zhì)成分聚集，促進(jìn)癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移，從而在上皮性卵巢癌的發(fā)生發(fā)展、轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)過程中發(fā)揮至關(guān)重要的作用[9-11]。文獻(xiàn)報(bào)道，TGF-β1蛋白在宮頸癌組織中表達(dá)增高，對促使宮頸癌細(xì)胞發(fā)生腫瘤逃逸、促進(jìn)宮頸癌的形成發(fā)揮重要作用，可作為判斷患者預(yù)后的指標(biāo)[12]。閆真等[13]研究發(fā)現(xiàn)，上皮性卵巢癌組織中TGF-β1表達(dá)升高，從而參與了上皮性卵巢癌的發(fā)生發(fā)展、侵襲及轉(zhuǎn)移。本研究結(jié)果顯示，上皮性卵巢癌TGF-β1表達(dá)與患者病理分級、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)，分析其原因可能為TGF-β1可促進(jìn)上皮性卵巢癌細(xì)胞自身的生長、浸潤和轉(zhuǎn)移，從而加速上皮性卵巢癌的惡化，并引發(fā)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。

MDR1是第1個(gè)確定的多藥耐藥相關(guān)基因，編碼了相對分子量為170 000的P-gp，P-gp是一種能量依賴性膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白質(zhì)，位于細(xì)胞漿膜，其可將細(xì)胞內(nèi)的一些化療藥物泵出細(xì)胞外，從而使患者出現(xiàn)耐藥，促進(jìn)腫瘤發(fā)展[14-16]。研究顯示，MDR1基因表達(dá)水平與多發(fā)性骨髓瘤疾病程度具有明顯的正相關(guān)性，可能作為多發(fā)性骨髓瘤的臨床評估預(yù)測指標(biāo)[17]。也有研究發(fā)現(xiàn)，MDR1基因與上皮性卵巢癌患者鉑類化療臨床預(yù)后密切相關(guān)，提示MDR1基因高表達(dá)可使患者更易出現(xiàn)耐藥，最終導(dǎo)致預(yù)后不佳[18]。本研究結(jié)果顯示，上皮性卵巢癌組TGF-β1、MDR1的陽性表達(dá)率顯著高于卵巢良性腫瘤組和正常卵巢組，提示TGF-β1與MDR1高表達(dá)參與了上皮性卵巢癌的發(fā)生及由良性向惡性發(fā)展的過程。吳夢等[18]研究發(fā)現(xiàn)，卵巢癌組織中TGF-β1的表達(dá)與臨床分期呈現(xiàn)正相關(guān)性，且TGF-β1與MDR1的表達(dá)呈正相關(guān)。本研究結(jié)果顯示，上皮性卵巢癌MDR1表達(dá)與患者病理分級、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)，與患者年齡、組織類型無明顯相關(guān)。分析其原因可能為當(dāng)上皮性卵巢癌組織MDR1呈現(xiàn)高表達(dá)時(shí)，易使患者產(chǎn)生耐藥，最終加速上皮性卵巢癌的進(jìn)展，促進(jìn)惡化。經(jīng)Spearman相關(guān)分析，上皮性卵巢癌患者病理組織TGF-β1與MDR1表達(dá)呈正相關(guān)，表明TGF-β1、MDR1與卵巢癌的疾病進(jìn)展相關(guān)，且TGF-β1與MDR1在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中具有相互協(xié)同作用[19-20]。

綜上所述，上皮性卵巢癌組織中TGF-β1、MDR1呈高表達(dá)，TGF-β1、MDR1陽性表達(dá)情況與病理分級、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況顯著相關(guān)，且TGF-β1與MDR1表達(dá)呈正相關(guān)，監(jiān)測上皮性卵巢癌患者TGF-β1與MDR1表達(dá)情況，對于評估上皮性卵巢癌轉(zhuǎn)移、惡性程度以及耐藥上具有重要的臨床意義。