CREPT在人腦膠質母細胞瘤組織中的表達及其與病人預后的關系

王睿健 張文超 尹 濤

膠質母細胞瘤（glioblastoma multiforme，GBM）屬于WHO分級Ⅳ級膠質瘤，是成人中樞神經系統最常見的原發性惡性腫瘤，病死率和復發率較高[1]。尋找潛在的生物學標志物對GBM 早期診治有重要意義。腫瘤高表達細胞周期相關蛋白（cell cyclerelated and expression elevated protein in tumor，CREPT）編碼基因位于人類20 號染色體長臂1 區1帶，包含7 個外顯子，在非小細胞肺癌[2]、結直腸癌[3]和宮頸癌[4]、腎癌[5]等多種腫瘤中高表達，與腫瘤的發生和發展密切相關。本文探討人腦GBM 組織CREPT的表達水平及其與病人預后的關系。

1 資料與方法

1.1 標本來源 選取2010 年1 月至2011 年1 月我院病理科保存的104 例GBM 組織，術前均未接受過放化療，其中男58 例，女46 例；年齡18～74 歲，平均（49.98±12.12）歲。選取2018 年1～12 月顱腦損傷內減壓術中切除的正常腦組織40例為對照，其中男22例，女18 例；年齡32～61 歲，平均（50.02±11.18）歲。兩組年齡、性別無統計學差異（P＞0.05）。

1.2 免疫組織化學染色法檢測CREPT 的表達 石蠟切片厚度4 μm。SP 免疫組化試劑盒購于北京博奧森生物技術有限公司，嚴格按照試劑盒說明書進行操作。經二甲苯脫蠟、梯度酒精水化、枸櫞酸溶液抗原修復后，聚乙二醇辛基苯基醚通透，用3%過氧化氫溶液滅活內源性過氧化物酶，隨后用山羊血清封閉。滴加鼠抗人CREPT 單克隆抗體（1:500，上海遠慕生物科技有限公司），濕盒內孵育過夜。用SP 法顯色，蘇木精復染。梯度酒精脫水，二甲苯溶液透明，中性樹膠封片，BX43 型顯微鏡觀察。每張切片觀察5個視野，每個高倍鏡至少觀察100個細胞。染色強度評分：0 分為無著色；1 分為淺棕色；2 分為中棕色；3 分為深棕色。染色細胞百分比評分：1%～25%為1分；26%～50%為2分；＞50%為3分。將染色強度評分和染色細胞百分比評分相乘得出染色積分，0～3分為低表達；4～9分為高表達[6]。

1.3 隨訪 術后進行門診隨訪，隨訪截止時間為2019年4月。記錄總生存期（overall survival，OS；術后第1天至死亡或最后一次隨訪）和無進展生存期（pro?gression-free survival，PFS；術后至第一次發生疾病進展或任何原因死亡的時間）。

1.4 統計學方法 采用SPSS 20.0軟件分析；計量資料以x±s表示，用t檢驗；計數資料采用χ2檢驗；采用多因素Cox比例回歸風險模型分析生存預后的影響因素；用Kaplan-Meier 法繪制生存曲線，采用Log-rank檢驗比較生存率；P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 GBM組織CREPT表達水平GBM組織高表達率（73.08%，76/104）明顯高于正常腦組織（10.00%，4/40；P＜0.05）。

2.2 GBM 生存預后的影響因素 多因素Cox 比例回歸風險模型風險結果顯示，年齡≥55歲、術后未接受放化療、CREPT 高表達是GBM 病人OS 和PFS 較短的獨立影響因素（P＜0.05；表1、2）。

表1 104例膠質母細胞瘤病人總生存期影響因素的Cox比例回歸風險模型分析結果

表2 104例膠質母細胞瘤病人無進展生存期影響因素的Cox比例回歸風險模型分析結果

圖1 Kaplan-Meier法繪制生存曲線分析CREPT表達水平與膠質母細胞瘤病人總體生存率和無進展生存率的關系

2.3 CREPT 表達水平與GBM 生存期的關系 高表達組中位OS 為12 個月（9～38 個月），中位PFS 為11 個月（9～43 個月）；低表達組中位OS 為18 個月（14～44個月），中位PFS為17個月（13～48個月）。低表達組OS和PFS均明顯高于高表達組（P＜0.05，圖1）。

3 討論

GBM 惡性程度較高，預后較差，尋找潛在的生物學標志物對GBM 臨床診治有重要意義。CREPT是近年來發現的一種新的癌基因，可通過調節細胞周期來調控癌癥的發生和發展。本文用免疫組化法檢測GBM 組織CREPT 的表達，結果顯示GBM 組織CREPT 高表達率明顯高于正常腦組織，說明CREPT可能參與GBM的發生，并且與惡性程度有關。

CREPT 在腫瘤中的作用機制可能有：調節免疫炎癥，影響腫瘤微環境[7]；調節細胞周期，促進細胞周期G1/S 轉換[8]；調控ROS/p53 通路[9]、RhoA 基因[10]和miRNA等[11]促進腫瘤細胞增殖、侵襲和遷移等。Wei等[12]發現CREPT 可以靶向miR-596，通過Wntcatenin 信號通路促進膠質瘤細胞增殖和侵襲，并且CREPT 表達水平增高與膠質瘤病人不良預后有關。

本文結果發現，年齡、術后放化療是影響GBM病人生存預后的獨立因素，與既往報道一致[13]。既往研究顯示，CREPT 高表達與腎癌[5]和結直腸癌[3]等不良生存預后有關。本文CREPT 高表達GBM 病人的OS 和PFS 明顯縮短，提示CREPT 對GBM 預后的早期評價可能有一定價值。

綜上所述，GBM 組織CREPT 呈高表達，與病人不良生存預后和腫瘤進展有關。