上調(diào)miR-145對(duì)Th9細(xì)胞分化及相關(guān)因子表達(dá)的影響①

韋 茜 黃尤藝 張湘蓮 姜海行 覃山羽

(廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院消化內(nèi)科,南寧 530021)

惡性腹腔積液(malignant ascites，MA)是由多種因素共同作用的結(jié)果，常見(jiàn)于卵巢癌、肝癌、胃癌等疾病的晚期階段，目前其形成機(jī)制尚不完全清楚。除了腫瘤細(xì)胞外，MA中還含有大量的免疫細(xì)胞，如淋巴細(xì)胞(主要是CD4+淋巴細(xì)胞)、巨噬細(xì)胞、粒細(xì)胞等，發(fā)生MA時(shí)，它們被有選擇性地募集到腹腔，進(jìn)而發(fā)揮生物學(xué)作用[1,2]。Th9細(xì)胞是CD4+輔助性T 細(xì)胞亞群，可由轉(zhuǎn)錄生長(zhǎng)因子β(transforming growth factor β，TGF-β)和IL-4在體外刺激誘導(dǎo)初始CD4+T 細(xì)胞獲得，主要分泌IL-9 和IL-10，具有免疫調(diào)節(jié)、促炎、抗腫瘤等效應(yīng)[3，4]。本課題組前期研究顯示Th9細(xì)胞在MA的發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮重要作用，而anti-IL-9處理可以延長(zhǎng)小鼠MA 模型的中位生存期[5，6]。

微小RNA145(miR-145)是微小RNA家族的一員，miR-145在多種癌癥中普遍下調(diào)，其通過(guò)靶向多種癌基因調(diào)控細(xì)胞周期、增殖、凋亡和侵襲等[7]。研究顯示卵巢癌患者M(jìn)A中的miR-145 表達(dá)下調(diào)[8]。此外，Lam等[9]研究顯示在卵巢癌小鼠模型中，激活miR-145可抑制卵巢腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移，從而減少M(fèi)A產(chǎn)生。Wang等[10]研究顯示在實(shí)驗(yàn)性重癥肌無(wú)力大鼠模型中，過(guò)表達(dá)miR-145可抑制Th17 細(xì)胞的分化。目前miR-145 的研究多集中在腫瘤細(xì)胞，但對(duì)MA 免疫微環(huán)境中的miR-145 與Th9 細(xì)胞之間的關(guān)系及其作用機(jī)制鮮有報(bào)道。因此，本研究重點(diǎn)探討上調(diào)miR-145對(duì)Th9細(xì)胞及相關(guān)因子表達(dá)的影響。

1 材料與方法

1.1材料 C57BL/6小鼠(6～8周，雌性)，體質(zhì)量18～22 g，SPF級(jí)，由廣西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物許可證號(hào)：SYXK(桂)2014-0002。RPMI1640細(xì)胞培養(yǎng)基，胎牛血清(美國(guó)Gibco)；青鏈霉素(北京索萊寶)；Recombinant Human TGF-β1，Recombinant Mouse IL-4(美國(guó)R&D)；EasySepTMMouse Na?ve CD4+T Cell Isolation Kit(加拿大StemCell)；Stain Buffer(FBS)，F(xiàn)ixation/Permeabilization Solution Kit，anti-Mouse CD3e，anti-Mouse CD28，AlexaFluor647標(biāo)記anti-Mouse IL-9抗體，PerCP-Cyanine5.5標(biāo)記anti-Mouse CD4抗體，Leukocyte Activation Cocktail，流式細(xì)胞儀FACSCantoⅡ(美國(guó)BD)；……