過(guò)敏原Der p 23重組蛋白制備及其特異性IgE化學(xué)發(fā)光檢測(cè)方法的建立①

周 鷹 吳美麗 朱晗婷 崔玉寶③

(南京醫(yī)科大學(xué)附屬無(wú)錫市兒童醫(yī)院兒科實(shí)驗(yàn)室，無(wú)錫214023)

塵螨種類較多，其中有30余種與人類疾病密切相關(guān)，是過(guò)敏性哮喘、過(guò)敏性鼻炎和消化道過(guò)敏性疾病的重要危險(xiǎn)因素[1]。塵螨及其過(guò)敏原通過(guò)氧化反應(yīng)損傷肺細(xì)胞的蛋白質(zhì)、脂質(zhì)和DNA，通過(guò)酶水解作用引起胃腸道炎癥[2]。我國(guó)呼吸道過(guò)敏性疾病研究聯(lián)盟對(duì)17座城市6 304例哮喘合并/或鼻炎患者進(jìn)行了調(diào)查，粉塵螨、屋塵螨和熱帶無(wú)爪螨皮膚挑刺試驗(yàn)陽(yáng)性率分別為59%、57.6%和40.7%，說(shuō)明此3種螨是我國(guó)過(guò)敏性疾病常見(jiàn)致敏螨種[3]。

引起過(guò)敏性疾病的抗原物質(zhì)稱為過(guò)敏原。世界衛(wèi)生組織/國(guó)際免疫聯(lián)合會(huì)根據(jù)生物體產(chǎn)生的過(guò)敏原的發(fā)現(xiàn)順序及氨基酸序列同源性予以命名，已公布屋塵螨過(guò)敏原23組分、粉塵螨過(guò)敏原32組分、熱帶無(wú)爪螨過(guò)敏原14組分。2013年，澳大利亞學(xué)者Weghofer等[4]報(bào)道從屋塵螨gt11cDNA表達(dá)文庫(kù)中篩選出過(guò)敏原Der p 23，其大腸桿菌表達(dá)產(chǎn)物可與74%屋塵螨過(guò)敏患者血清結(jié)合，陽(yáng)性率高于過(guò)敏原主要組分Der p 1和Der p 2，因此被認(rèn)為是新發(fā)現(xiàn)的屋塵螨過(guò)敏原主要組分。本研究制備屋塵螨重組蛋白Der p 23，建立了化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)該組分與屋塵螨過(guò)敏性疾病患者血清IgE結(jié)合率，結(jié)果報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1材料

1.1.1血清 采集南京醫(yī)科大學(xué)附屬無(wú)錫市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科過(guò)敏原檢測(cè)獲得的屋塵螨過(guò)敏原陽(yáng)性血清(Mediwiss Analytic GmbH，德國(guó))，且乙肝表面抗原(HBsAg)、丙型肝炎抗體(抗-HCV抗體)、人類免疫缺陷病毒1/2抗體(抗-HIV 1/2抗體)和梅毒螺旋體抗體(抗-TP抗體)均為陰性。……