lncRNA UCA1靶向miR-145調節卵巢癌細胞SK-OV-3增殖和遷移行為①

董志紅 古力加汗·艾爾肯 鐵麗萍 沈谷群

(新疆醫科大學附屬腫瘤醫院,烏魯木齊830000)

卵巢癌是女性生殖系統最常見的惡性腫瘤之一，嚴重影響女性健康，預后較差且復發率較高[1，2]。因此，尋找新的診斷指標和治療方法是改善卵巢癌患者預后的關鍵。長鏈非編碼RNA(long non-coding RNA,lncRNA) 是RNA聚合酶Ⅱ轉錄產物，是一類不編碼蛋白質的RNA[3]。研究表明，lncRNA與腫瘤的發生發展密切相關，其中，lncRNA UCA1參與卵巢癌的發生發展，在卵巢癌組織中異常表達，通過上調MMP2、MMP9促進卵巢癌細胞侵襲轉移[4-8]。短鏈非編碼RNA miR-145過表達可明顯抑制卵巢癌細胞增殖并降低其運動能力[9-11]。生物信息學預測發現UCA1和miR-145可能存在靶向關系，但UCA1和miR-145在卵巢癌細胞增殖和遷移過程中是否存在靶向調控關系尚未見報道。因此，本文將探究沉默和過表達UCA1對卵巢癌細胞增殖與遷移的作用及其與miR-145的關系。

1 材料與方法

1.1材料 人卵巢癌細胞株A2780、SK-OV-3購自中國科學院細胞庫，人正常卵巢上皮細胞HOSEpiC由本院實驗室保存；shUCA1、miR-145 inhibitor購自廣州銳博生物公司；DMEM培養液、RPMI1640培養液、胰酶、雙抗和胎牛血清購自Gibco公司；pcDNA3.1質粒、lipo3000、TRIzol試劑購自賽默飛世爾公司；psiCHECK質粒、Dual Luciferase報告基因試劑盒、逆轉錄試劑盒、熒光定量試劑盒購自Promega 公司；CCK8試劑盒購自同仁公司；UCA1全序列合成及引物合成由上海生工完成；增殖細胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、基質金屬蛋白酶-15/-28 (matrix metalloproteinase-15/28,MMP-15/28)、CyclinD1、周期素依賴性激酶2(cdc2 related protein kinase,CDK2)、活化蛋白激酶B (jun B protooncogene,JunB)、GAPDH一抗及HRP 標記的羊抗鼠、羊抗兔二抗均購自北京博奧森生物公司。

1.2方法

1.2.1細胞培養 人正常卵巢上皮細胞HOSEpiC、人卵巢癌細胞A2780培養于含10%胎牛血清的RPMI1640培養基，SK-OV-3細胞培養于含10%胎牛血清的DMEM培養基，37℃、5% CO2，隔天觀察換液，細胞融合率達到90%時傳代?！?br>