黃花倒水蓮下調(diào)miR-369對LPS誘導(dǎo)大鼠心肌細(xì)胞損傷的保護(hù)機(jī)制研究

代 天 楊 萍 趙 謙 劉泰民 蔣 品 張?zhí)K川

(江漢大學(xué)附屬醫(yī)院(武漢市第六醫(yī)院)心血管內(nèi)科，武漢430015)

內(nèi)毒素血癥由內(nèi)毒素感染引起，可導(dǎo)致致死性感染休克、多器官功能障礙或衰竭等，病死率極高[1]。心臟功能障礙是內(nèi)毒素血癥最常見的并發(fā)癥，研究表明約40%的內(nèi)毒素血癥患者出現(xiàn)可逆性心肌抑制，而合并心肌功能障礙的患者病死率高達(dá)50%[2,3]。因此尋找有效的藥物預(yù)防及治療內(nèi)毒素血癥所致的心肌損傷具有重要臨床意義。

黃花倒水蓮(Polygala fallax Hemsl，PFH)是遠(yuǎn)志科植物黃花倒水蓮的干燥根，具有良好的抗炎、抗病毒、抗氧化、抗應(yīng)激及改善心肌缺血等作用[4,5]。但PFH對心肌損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制尚不明確。本研究以大鼠心肌細(xì)胞株為研究對象，體外探討PFH對脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)誘導(dǎo)的大鼠心肌細(xì)胞損傷的作用及其潛在分子機(jī)制。

1 材料與方法

1.1.1細(xì)胞來源 大鼠心肌細(xì)胞H9c2和CP-R073由中國科學(xué)院上海細(xì)胞庫提供。

1.1.2主要試劑 黃花倒水蓮(PFH，200 g，贛州市醫(yī)藥公司)；脂多糖(LPS，純度≥99%，Solarbio公司)；LipofectamineTM2000轉(zhuǎn)染試劑(碧云天生物技術(shù)研究所)；miR-369抑制物(miR-369-inhibitor)及陰性對照(inhibitor NC)、miR-369模擬物(miR-369-mimics)及陰性對照(mimics NC)、AKT1小干擾RNA(siRNA-AKT1)及陰性對照(siRNA-NC)(廣州銳博生物科技有限公司)；MTT試劑、DMSO(日本同仁生物科技有限公司)；Annexin V-FITC/PI凋亡檢測試劑盒(Pierce Biotechnology公司)；TRIzol、RIPA裂解液(Invitrogen公司)；AKT1抗體(美國Millipore公司，貨號：02066000)；Bcl-2抗體、Bax抗體、辣根過氧化酶標(biāo)記的山羊抗大鼠IgG抗體(Sigma-Aldrich公司，貨號：ABC345、AB2915和AP183P)。

1.2方法

1.2.1細(xì)胞培養(yǎng)、轉(zhuǎn)染 將H9c2和CP-R073細(xì)胞接種于含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基中，置于37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。當(dāng)細(xì)胞鋪滿培養(yǎng)皿時(shí)，加入1 ml胰酶消化細(xì)胞1 min，加入DMEM完全培養(yǎng)基終止消化。……