干擾長(zhǎng)鏈非編碼RNA AFAP1-AS1抑制人鼻咽癌HNE2細(xì)胞增殖、侵襲及體內(nèi)移植瘤形成的研究①

謝天飛 王凌云 劉 麗 桑建中

(河南醫(yī)學(xué)高等專(zhuān)科學(xué)校耳鼻咽喉科，鄭州 451191)

鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma，NPC)是一種惡性程度較高的頭頸部腫瘤，其中、晚期多采用放療輔以化療治療，但5年生存率依然不足50%[1]。長(zhǎng)鏈非編碼RNA(long noncoding RNA，lncRNA)是目前研究較多的一類(lèi)參與腫瘤細(xì)胞增殖、遷移、轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)等進(jìn)程的無(wú)蛋白質(zhì)編碼功能的RNA分子[2]。肌動(dòng)蛋白纖維相關(guān)蛋白1-反義RNA1(actin filament associated protein 1-antisense RNA1，AFAP1-AS1)作為lncRNA的一員，通過(guò)改變肌動(dòng)蛋白絲及微絲的完整性調(diào)控細(xì)胞的吞噬運(yùn)動(dòng)[3]。目前，針對(duì)AFAP1-AS1的研究表明，其在腫瘤中表達(dá)量明顯高于正常組織，表明AFAP1-AS1高表達(dá)與腫瘤的發(fā)生發(fā)展相關(guān)，但其參與腫瘤相關(guān)進(jìn)程的具體作用機(jī)制尚不清楚[4，5]。本研究通過(guò)短發(fā)卡RNA(short hairpin RNA,shRNA)干擾AFAP1-AS1并轉(zhuǎn)染人鼻咽癌HNE2細(xì)胞進(jìn)行體外細(xì)胞與體內(nèi)裸鼠移植瘤試驗(yàn)，探索AFAP1-AS1干擾對(duì)NPC的影響及其可能的作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1材料

1.1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 5周齡SPF級(jí)雄性BALB/c裸鼠10只，體質(zhì)量(16.37±1.07)g，購(gòu)自北京阜康生物科技股份有限公司[SCXK(京)2014-0009]，所有BALB/c裸鼠均飼養(yǎng)于中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所屏障環(huán)境動(dòng)物房[SYXK(京)2015-0035]。

1.1.2細(xì)胞來(lái)源 NPC細(xì)胞HNE2購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院上海細(xì)胞生物所。

1.1.3主要試劑 胎牛血清(FBS)、RPMI1640培養(yǎng)液購(gòu)自Gibco公司；lncRNA AFAP1-AS1-shRNA、NC-shRNA購(gòu)自上海吉?jiǎng)P基因技術(shù)有限公司；脂質(zhì)體、Lipofectamine?2000購(gòu)自Thermo Fisher Scienti-fic；血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth pactor,VEGF)、基質(zhì)金屬蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9，MMP-9)、β-actin抗體以及抗小鼠/兔IgG購(gòu)自美國(guó)Santa Cruz公司；PCR試劑盒購(gòu)自美國(guó)Promega公司；所有引物由上海生工合成。

1.1.4主要儀器 TDL-4臺(tái)式離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠)；IX51倒置顯微鏡(日本OLYMPUS公司)；RI-6000酶標(biāo)分析儀(美國(guó)雷杜公司)；FACS Canto Ⅱ 流式細(xì)胞儀(美國(guó)BD公司)；Image Master VDS凝膠自動(dòng)成像儀(瑞典Pharmacia公司)。……