miR-150缺失通過細(xì)胞免疫應(yīng)答促進Ⅰ型糖尿病的發(fā)生①

高麗清 梁 靖 張 爽 李鈺銳 李潔心 劉 瀟 劉美麗 段一碩 趙亞林 張 琦 李曉曉 張 冰 王勇滿 李秋飛 鄭全輝

(華北理工大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，河北省慢性疾病重點實驗室，唐山市慢性病臨床基礎(chǔ)研究重點實驗室,唐山 063210)

目前研究表明，Ⅰ型糖尿病(type Ⅰ diabetes mellitus,T1DM)是由于機體免疫自穩(wěn)功能失常導(dǎo)致的一類自身免疫性疾病，由抗體介導(dǎo)的體液免疫應(yīng)答和效應(yīng)T細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞免疫應(yīng)答對胰島β細(xì)胞的攻擊是T1DM發(fā)病的重要原因[1,2]。microRNAs是一類具有負(fù)向基因表達調(diào)節(jié)功能的短鏈非編碼RNA(約22個核苷酸)，在機體多種免疫細(xì)胞的發(fā)育、分化和功能發(fā)揮中具有重要調(diào)控作用[3]。miR-150在淋巴細(xì)胞中高表達。已有研究表明，miR-150在T1DM患者血清/血漿、外周血單個核細(xì)胞和胰島等組織中表達降低，提示miR-150在T1DM的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮關(guān)鍵作用，然而其作用機制目前尚未明確[4]。既往研究發(fā)現(xiàn)，miR-150缺失導(dǎo)致自然殺傷性T細(xì)胞IFN-γ產(chǎn)生增加，促進小鼠T1DM的發(fā)生[5]。本研究采用鏈脲佐菌素(streptozotocin，STZ)處理T1DM小鼠模型，進一步研究了miR-150對T1DM相關(guān)自身抗體以及效應(yīng)性CD4+T細(xì)胞的影響，以期為T1DM的免疫學(xué)發(fā)病機制研究提供新的線索。

1 材料與方法

1.1材料

1.1.1實驗動物 miR-150基因敲除(miR-150 knockout,150KO)和野生型正常對照(wild type,WT)的C57BL/6小鼠購自美國Jackson實驗室(Bar Harbor,ME,USA)，并在華北理工大學(xué)SPF級鼠房飼養(yǎng)、繁殖。實驗選取4～8周齡雄性150KO和WT小鼠，每組6～8只。小鼠實驗操作按照華北理工大學(xué)實驗動物管理委員會規(guī)定進行。miR-150 敲除小鼠基因型鑒定采用下列引物:F：5′-CAAGGACAGGAACCCTTCAGCA-3′，R：5′-CCATGATGCCTGGAAGACATTTC-3′。miR-150KO小鼠和WT小鼠產(chǎn)物長度分別為262 bp和866 bp。

1.1.2主要試劑與儀器 STZ購自Sigma公司；胰島細(xì)胞自身抗體(ICA)和谷氨酸脫羧酶自身抗體(GADA)檢測ELISA試劑盒購自MultiSciences公司；……