絞股藍(lán)總苷對(duì)缺氧/復(fù)氧小鼠海馬HT22細(xì)胞PAK1、CREB表達(dá)及凋亡的影響

祁敏芳 吳慧娟 鄭貞蒼 徐挺立 林露

缺血性腦卒中臨床上常見(jiàn)，在老年人群中發(fā)病率較高[1]。研究證實(shí)梗死組織周邊缺血半暗帶的血流恢復(fù)能減輕患者的臨床癥狀，但引起的缺血再灌注損傷會(huì)導(dǎo)致更嚴(yán)重的腦損傷[2]。缺血再灌注損傷過(guò)程中的細(xì)胞凋亡是造成腦損傷的重要機(jī)制。絞股藍(lán)總苷（gypenosides，Gyp）是宿根草質(zhì)植物，味甘苦，性涼，結(jié)構(gòu)類(lèi)似于人參的藥理活性成分人參皂甙[3]。近年來(lái)發(fā)現(xiàn)Gyp的藥理作用包括神經(jīng)活性保護(hù)、消除氧自由基、抗缺血再灌注損傷、抗腫瘤、調(diào)節(jié)脂代謝等[4]。研究證實(shí)Gyp可減輕小鼠腎臟缺血/再灌注損傷[5]。然而，關(guān)于Gyp對(duì)腦缺血/再灌注損傷的作用及機(jī)制鮮有報(bào)道。p21活化蛋白激酶（p21-activated kinase，PAK）家族在腦組織中有廣泛表達(dá)，PAK1是其家族成員之一，主要表達(dá)于海馬CA1區(qū)，能夠被多種突觸蛋白所激活。有研究表明PAK1與大頭畸形、癲癇發(fā)作和言語(yǔ)延遲等神經(jīng)發(fā)育障礙疾病相關(guān)[6-7]。環(huán)磷酸腺苷反應(yīng)單元結(jié)合蛋白（cyclic adenosine monophosphate response element binding protein，CREB）是一種具有調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄功能的核內(nèi)蛋白質(zhì)。有研究表明CREB表達(dá)沉默可促進(jìn)氧糖剝奪/復(fù)氧皮層神經(jīng)元的凋亡[8]。本研究擬建立Gyp缺氧/復(fù)氧（oxygen/reoxygenation，O/R）小鼠海馬HT22細(xì)胞模型來(lái)觀察Gyp對(duì)PAK1、CREB表達(dá)及細(xì)胞凋亡的影響。

1 材料和方法

1.1 主要試劑及儀器 DMEM培養(yǎng)基（批號(hào)：D6046）購(gòu)自美國(guó) Gibco 公司；FBS（批號(hào)：KL-NXQ05）、四唑鹽（methyl thiazolyl tetrazolium，MTT）相關(guān)試劑（批號(hào)：KLS0050）均購(gòu)自上海康朗生物科技有限公司；鼠源βactin抗體（批號(hào)：T0022）購(gòu)自美國(guó)Affinity公司；鼠源B細(xì)胞淋巴瘤/白血病-2（B cell lymphoma/leukemia-2，Bcl-2）（批號(hào)：10195-MM09）、鼠源 Bcl-2相關(guān) X 蛋白（Bcl-2-associated X protein，Bax）（批號(hào)：10195-MM09）抗體均購(gòu)自北京綠源伯德生物科技有限公司；鼠源PAK1抗體（批號(hào)：AMP5062-11）購(gòu)自上海煊翎生物科技有限公司；……