推拿對失神經(jīng)肌萎縮大鼠肌特異性microRNA和肌衛(wèi)星細(xì)胞增殖分化相關(guān)因子的影響

重慶醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)藥學(xué)院，重慶市 400016

周圍神經(jīng)損傷后，骨骼肌失去神經(jīng)支配，出現(xiàn)肌萎縮[1-2]，目前主要治療手段是神經(jīng)修復(fù)術(shù)。由于神經(jīng)生長速度緩慢，在軸突達(dá)到靶器官前，肌肉會處于持續(xù)萎縮狀態(tài)[3]。在神經(jīng)重建前延緩肌萎縮程度，對肌肉功能恢復(fù)有重要價值。

肌衛(wèi)星細(xì)胞的增殖和分化是萎縮肌肉修復(fù)再生的基石[4]。肌肉受損后，肌衛(wèi)星細(xì)胞激活，增殖分化為新生肌纖維參與骨骼肌再生與修復(fù)[5]。其中配對盒轉(zhuǎn)錄因子(paired box transcription factor 7,Pax7)是維持肌衛(wèi)星細(xì)胞增殖水平的重要標(biāo)志分子。肌肉受損后，Pax7表達(dá)上調(diào)，激活肌衛(wèi)星細(xì)胞增殖、分化。成肌分化抗原(myogenic differentiation antigen,MyoD)和肌細(xì)胞生成素(myogenin,MyoG)是肌衛(wèi)星細(xì)胞分化的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子，也是Pax7 的下游分子；MyoD 為初級分化因子，主要調(diào)控成肌分化；MyoG 為次級分化因子，主要調(diào)控肌管終末分化形成成熟肌纖維[6]。microRNA是涉及轉(zhuǎn)錄后基因沉默的一類非編碼RNA，其中microRNA-133a、microRNA-206 和microRNA-1 為肌特異性microRNA，對Pax7、MyoD、MyoG 的表達(dá)具有調(diào)控作用[7]。

推拿是中醫(yī)的重要組成部分，對骨和軟組織損傷有很好療效[8-9]。本研究觀察推拿對失腓總神經(jīng)大鼠腓腸肌中microRNA-133a、microRNA-206、microRNA-1、Pax7、MyoD、MyoG 表達(dá)的影響，從肌衛(wèi)星細(xì)胞增殖分化的角度探討推拿干預(yù)失神經(jīng)肌萎縮的可能機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動物與分組

SPF 級健康雄性Sprague-Dawley 大鼠42 只，體質(zhì)量(270±10) g，由成都達(dá)碩實(shí)驗(yàn)動物有限公司提供，動物合格證號SCXK(川)2015-030。分籠飼養(yǎng)，室溫(22±2) ℃，相對濕度(60±5)%，明暗12 h 交替，飲食水自由攝取。

適應(yīng)性喂養(yǎng)1 周后，大鼠編號，計(jì)算機(jī)自動生成42個兩位數(shù)的隨機(jī)數(shù)字表，每個編號對應(yīng)一個隨機(jī)數(shù)字，再按隨機(jī)數(shù)字的大小重新排列，序號1～6 為假手術(shù)組(n=6)，7～25 為模型組(n=18)，26～42 為推拿組(n=18)。……