Klotho對缺血再灌注急性腎損傷的影響研究

章煒 王鳴 費曉 葛玉英 楊秀 謝祥成 楊麗莉 錢盈盈

急性腎損傷是臨床常見的危重病之一，具有發病率高，病情兇險，預后差等特點。迄今為止，除了腎臟替代治療外，其尚缺乏其他有效的治療方法。基因Klotho是Kuro等[1]在1997年研究原發性高血壓時發現的抗衰老基因，主要表達于腎臟組織。Klotho蛋白分為膜型和分泌型兩種。膜型Klotho蛋白是骨源性激素成纖維生長因子23的共受體，參與鈣磷代謝過程；分泌型Klotho蛋白為一種體液因子，可發揮多種生物學作用[2]。多種因素如炎癥因子、氧化應激、尿毒癥毒素等可誘導Klotho表達下調[2]。研究顯示，急性腎損傷是一種Klotho缺乏性疾病，腎臟缺血期Klotho表達即開始下調，隨后出現血清Klotho蛋白水平下降，一直持續至再灌注后7 d仍未能完全恢復，補充Klotho蛋白可能具有保護作用[3]。然而，Klotho的具體作用機制仍未完全明確。基于此，本研究進一步探討Klotho對缺血再灌注急性腎損傷的影響及可能的作用機制，現報道如下。

1 材料和方法

1.1 材料 60只SPF（無特定病原體）級雄性BALB/c小鼠，約 6～8周齡，體重20～25 g，飼養于SPF級實驗動物房。小鼠Klotho蛋白ELISA試劑盒（武漢優爾生科技股份有限公司）；小鼠中性粒細胞明膠酶相關脂質運載蛋白 （neutrophil gelatinase associated lipocalin，NGAL）ELISA試劑盒（美國R&D systems公司，MLCN20）；兔抗小鼠Klotho抗體（美國abcam公司，ab203576）；兔抗小鼠B細胞淋巴瘤/白血病-2（B cell lymphoma/leukemia-2，Bcl-2）抗體（美國 abcam 公司，ab182858），兔抗小鼠B細胞淋巴瘤/白血病-2相關X蛋白（bcl-2-associated X protein，Bax）抗體（美國 abcam 公司，ab182733）；兔抗小鼠裂解的天冬氨酸特異酶切的半胱氨酸蛋白酶（cleaved Caspase）-3抗體（美國Cell Signaling Technology公司，9661）；兔抗小鼠CD68抗體（美國abcam公司，ab125212）；逆轉錄試劑盒（日本TAKARA公司，DRR 037A）；real-time PCR熒光定量試劑盒（日本TAKARA公司，DRR081A）；……