乙型肝炎病毒血清標(biāo)志物常用檢測方法的比較

【摘要】目的：比較時間分辨熒光免疫技術(shù)（TRFIA）和酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）在乙型肝炎病毒血清中五種標(biāo)志物檢測中的優(yōu)劣。方法：選取已經(jīng)確證的80例患者標(biāo)本，分別采用TRFIA和ELISA兩種方法檢驗，對實驗結(jié)果有差異的標(biāo)本采取雙孔平行試驗，保障結(jié)果有效可靠。結(jié)果：陽性檢出率高的是時間分辨熒光免疫技術(shù)對HBcAb、HBeAb的比較差異有重要統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），相反這兩種方法對其他三種HBVM檢出陽性率比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)論：這兩種常見的方法都是可以用于乙型肝炎診斷，符合率也比較高，但是時間分辨熒光免疫技術(shù)陽性檢驗率比較高、特異性更高穩(wěn)定性也更加好，可以更好的對乙型肝炎患者體內(nèi)的病原體定量， 該實驗結(jié)果分析對臨床醫(yī)師診治乙型肝炎疾病提供比較重要的科學(xué)依據(jù)和實驗數(shù)據(jù)，有發(fā)展推廣應(yīng)用的價值。

【關(guān)鍵詞】乙型肝炎病毒;酶聯(lián)免疫吸附試驗;時間分辨熒光免疫

【中圖分類號】R446.61 【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A 【DOI】10.12332/j.issn.2095-6525.2020.12.274

1 資料與方法

1.1對象

選取本院2018年-2019年一年中收治的乙肝患者隨機(jī)抽取其中80例作為本次實驗研究對象，80例病患都已完全符合乙型肝炎臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)，抽取患者血清樣本化驗分析。

1.2方法

囑咐患者抽血前幾天不飲酒，不吃過于油膩辛辣的東西。在幾天后早上患者處于空腹?fàn)顟B(tài) 抽取每位患者5～10ml靜脈血，然后放置在促凝劑黃色真空管內(nèi)和含惰性分離膠內(nèi)，用離心機(jī)分離血清樣本，然后進(jìn)行檢測，嚴(yán)格遵守試劑盒說明書方法和檢測儀器的操作規(guī)范來進(jìn)行。酶聯(lián)免疫吸附法為定性檢測方法，先把試劑盒拿出恒溫室，使用加樣槍滴取微量樣本于板孔底部，再加稀釋液振蕩混勻后上機(jī)檢測。依據(jù)儀器檢測結(jié)果判讀陰性或者陽性，若HBV-M中的某一項為弱陽性則將其標(biāo)記并設(shè)置2個平行孔復(fù)查。同樣的患者標(biāo)本，時間分辨熒光免疫法為定量檢測方法，檢測時同樣先將試劑從冰箱復(fù)溫，檢查儀器是否正常以及準(zhǔn)備工作完成后，直接將患者血清樣本上機(jī)進(jìn)行測試，將測試結(jié)果與正常范圍參數(shù)進(jìn)行對比，超出正常參考范圍值則判斷為陽性，相反為陰性。

1.3觀察指標(biāo)

用不同方法記錄分析對乙型肝炎病毒標(biāo)志物的陽性數(shù)目，并計算其陽性檢出率。酶聯(lián)免疫吸附法依據(jù)HBcAb、HBeAb、HBsAb、HBeAg、HBsAg各項指標(biāo)的密度來判讀陰、陽性;時間分辨熒光免疫法檢測指標(biāo)及其正常范圍為HBcAb（0～0.9 PEU/ml）、HBeAb（0～0.2 PEU/ml）、HBsAb（0～10 mU/ml）、HBeAg（0～0.5 PEU/ml）、HBsAg（0～0.5 ng/ml），指標(biāo)值超過正常范圍則視為陽性。陽性率=（陽性的列數(shù)/總例數(shù)）×100%。陽性符合率=（ELISA陽性檢出例數(shù)/TRFIA陽性檢出例數(shù)）×100%。

2 結(jié)果

通過實驗結(jié)果見表1。

3 討論

通過本研究計算表明利用時間分辨熒光免疫法檢出的HBcAb和HBeAb的陽性率都顯著高于酶聯(lián)免疫吸附法，其中的差異性都有重要統(tǒng)計學(xué)意義，其余各指標(biāo)相互間無比較差異和無統(tǒng)計學(xué)意義。

通過對抗體抗原酶標(biāo)記在載體上來進(jìn)行定性分析是傳統(tǒng)技術(shù)酶聯(lián)免疫吸附法的核心原理，對血清檢標(biāo)本檢測不能定量但是能定性，有操作簡單承認(rèn)低檢測出結(jié)果快的優(yōu)點(diǎn)，所以畢竟符合病毒的初步篩查核驗，適合條件不是很好的基礎(chǔ)醫(yī)療診所應(yīng)用;但是無法對病毒進(jìn)行定量檢測，只能定性檢測分析，沒有辦法對血清中的病毒動態(tài)檢測計算，檢測靈敏度比較多，人工檢測操作易污染，如果患者血清中含有的病毒濃度較低就比較難以檢測出來，無法為臨床診治醫(yī)師提供詳細(xì)的數(shù)據(jù)來判定患者的感染情況，病毒的復(fù)制情況，從而達(dá)不到臨床合理用藥和診治。時間分辨熒光免疫法檢測能夠覆蓋傳統(tǒng)酶聯(lián)免疫吸附試驗一些不足，通過延長響應(yīng)時間，有效降低非特異性熒光信號干擾，甚至可以忽略檢測靈敏度高，血清病毒標(biāo)志物的特異性含量可通過標(biāo)準(zhǔn)曲線詳細(xì)分析得到。因此，時間分辨熒光免疫分析法彌補(bǔ)了酶聯(lián)免疫吸附法不能準(zhǔn)確定量分析的缺陷，整個血清樣本檢測過程由自動檢測儀完成，避免了人為操作和技術(shù)差異造成的檢測誤差，保證了檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。與其他檢測方法相比，有比較大的優(yōu)勢，值得推廣應(yīng)用

4 結(jié)論

綜上所述，酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）可用于基礎(chǔ)設(shè)施落后的基層醫(yī)療機(jī)構(gòu)。它具有技術(shù)要求低、檢測方便、快速、經(jīng)濟(jì)等特點(diǎn)。時間分辨熒光免疫分析具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、核心抗體檢出率高的特點(diǎn)。因此，對乙型肝炎患者的診斷更為準(zhǔn)確可靠，同時，適用于已感染者，能準(zhǔn)確分析血清樣本，得到特異性病毒含量。為臨床感染程度和疾病發(fā)展程度提供了明確的參考依據(jù)，為臨床醫(yī)生治療乙肝患者提供了重要的科學(xué)依據(jù)。從而達(dá)到降低患者發(fā)病率的目的。

參考文獻(xiàn)：

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作者簡介：

范芬芬（1976.2-），女，漢族，河南省靈寶市，大專，技師，研究方向：醫(yī)學(xué)檢驗。