半乳糖凝集素3低表達對肝癌細胞增殖的影響及作用機制

吳雪艷，趙依納，王小杰，李美川，李欣

（1.承德醫學院人體解剖學教研室，河北 承德 067000；2.河北生殖婦產醫院生殖醫學科，石家莊 050000；3.承德醫學院組織與胚胎學教研室，河北 承德 067000；4.承德醫學院基礎醫學研究所，河北 承德 067000）

肝癌是常見的惡性腫瘤，具有惡性程度高、進展快、術后生存期短、易復發和轉移、預后差等特征。探索肝癌的發病機制，尋求有效的分子治療靶點已成為近年來的研究熱點。半乳糖凝集素3（galectin 3，Gal-3） 是半乳糖凝集素家族成員之一，廣泛表達于正常細胞和腫瘤細胞，已有研究［1-2］證實，Gal-3在肝癌中表達上調，參與肝癌的發生發展，與預后密切相關。Gal-3是一種新的腫瘤標志物和治療靶點，具體作用機制尚不明確。本研究通過抑制Gal-3在肝癌HepG2細胞中表達，探討Gal-3低表達對肝癌HepG2細胞增殖的影響及作用機制，為肝癌發生機制的研究及臨床靶向治療提供一定的實驗依據。

1 材料與方法

1.1 細胞、試劑與儀器

人肝癌細胞系HepG2 （上海中科院細胞庫），細胞培養基DMEM （美國Gibco公司），脂質體Lipofectamine2000 （Lipo2000）、Trizol試劑和靶向Gal-3 siRNA （美國Invitrogen公司），胎牛血清 （FBS） （杭州四季青公司），RIPA裂解液、BCA蛋白定量試劑盒和5×蛋白上樣緩沖液 （北京索萊寶生物有限公司），Gal-3、磷脂酰肌醇-3激酶 （phosphatidylinositol 3-kinase，PI3K）、蛋白激酶 （protein kinase B，PKB，AKT）、磷酸化蛋白激酶 （phosphorylated protein kinase B，p-AKT） 和磷酸化哺乳動物雷帕霉素靶蛋白 （phosphorylated mammalian target of rapamycin，p-mTOR） 兔抗人單克隆抗體 （美國Epitomics公司），β-actin兔抗人單克隆抗體 （ABclonal公司），增殖細胞核抗原 （proliferating cell nuclear antigen，PCNA） 小鼠抗人單克隆抗體 （武漢三鷹生物技術有限公司），山羊抗兔二抗、山羊抗小鼠二抗 （美國KPL公司），Gal-3和β-actin引物（上海生工有限公司設計并合成），TaKaRa反轉錄試劑盒 （大連寶生物工程有限公司），MTT增殖試劑盒 （上海碧云天公司）。……