miR-146a對人黑色素瘤A375細胞增殖和侵襲的影響及作用機制

王麗納，王紅蘭，莊永燦，王凱波，陳文標

（1.福建醫科大學附屬泉州第一醫院皮膚科，福建 泉州 362000；2.沈陽市第七人民醫院皮膚科，沈陽 110003；3.泉州醫學高等專科學校病原微生物與免疫學教研室，福建 泉州 362000）

黑色素瘤起源于黑色素細胞，多發生于皮膚，易侵襲、轉移，并且難以治愈，是皮膚癌中最具侵襲性的腫瘤。雖然黑色素瘤僅占皮膚癌的4%，但死亡人數約占所有皮膚癌死亡人數的75%［1-2］。微小RNA（microRNA，miRNA）是細胞內的一類小分子RNA，核苷酸片段長度17～25，主要功能是調控多種基因轉錄，通過抑制蛋白的表達繼而調控細胞的增殖、凋亡等生命活動［3-4］。越來越多的研究［5-6］發現，黑色素瘤中存在著多種miRNA表達異常，miRNA可能在黑色素瘤進展過程中發揮著重要的作用。miRNA-146a （miR-146a）作為miR-146家族中的一員，已被證實是很強的促凋亡因子，參與了多種腫瘤增殖、遷移和侵襲的生物學過程［7-8］。研究［9］發現，miR-146a通過下調NUMB蛋白，激活Notch信號參與黑色素瘤的發生發展。本研究通過將miR-146a 模擬物或抑制劑轉染入黑色素瘤A375細胞，使 miR-146a過表達或低表達，檢測miR-146a對黑色素瘤細胞A375增殖侵襲能力及對FBXL10蛋白表達的影響，旨在闡明miR-146a在黑色素瘤發生發展中的作用機制。

1 材料與方法

1.1 主要試劑和儀器

皮膚黑色素瘤細胞系A375購于中國科學院上海細胞庫；FBXL10抗體購自美國Cell signalling公司；FBXL10mRNA由大連寶生物有限公司設計并合成；miR-146a 模擬物、抑制劑及陰性對照均由上海吉瑪公司設計合成；DMEM培養基、PRMI 1640培養基與胎牛血清購于美國Gibco公司；轉染試劑與TRIzol購自美國Invitrogen 公司。

1.2 方法

1.2.1 細胞轉染及分組:收集A375細胞，胰酶消化，重懸制備成細胞懸液并計數，以3.0×105/孔接種于6孔板，細胞生長達到70%～80%時開始轉染，步驟按照說明書進行操作。……