miR-9-5P靶向CDH1、CTNNA1和ITGA6對脈絡膜黑色素瘤細胞功能的影響

應曼曼，張曉楠，劉然，寧宏

（中國醫科大學附屬第一醫院眼科，沈陽 110001）

脈絡膜黑色素瘤是成人最常見的原發性眼內惡性腫瘤，病因尚不明確，常發生于50～60歲，易通過血液循環轉移［1-3］。許多患者在出現臨床或影像學轉移之前，通常已經有多年的肝轉移［4］。早期發現和治療有助于提高患者的生存率和改善預后，因此，深入研究脈絡膜黑色素瘤的發生和調控機制將有助于發現腫瘤發生相關的關鍵靶分子，為脈絡膜黑色素瘤的治療提供新的靶點。

非編碼RNA （non-coding RNAs，ncRNAs） 包括微小RNA （microRNAs，miRNAs）、長鏈非編碼RNAs（long ncRNAs，lncRNAs） 和環狀非編碼RNAs（circular RNAs，circRNAs）。研究表明，miRNAs在腫瘤中發揮負調控作用。miR-9-5p能調控甲狀腺癌［5］、胰腺癌［6］等的發生發展，但關于它在脈絡膜黑色素瘤細胞增殖、凋亡、遷移和侵襲中的調控作用尚未見報道。本研究通過轉染miR-9-5p 至人脈絡膜黑色素瘤細胞，觀察細胞的增殖、凋亡、遷移及侵襲的變化情況，并分析miR-9-5p作用的靶基因，旨在探討其在脈絡膜黑色素瘤中的作用機制。

1 材料與方法

1.1 細胞培養及轉染

取凍存的人眼侵襲性脈絡膜黑色素瘤細胞系MUM-2B和MUM-2C （上海拜力生物技術有限公司），在溫水中快速搖晃溶解。用含10%胎牛血清 （美國Gibco公司） 的MEM培養基 （美國HyClone公司），于5% CO2、37 ℃培養箱中培養細胞。陰性對照（negative control，NC）為隨機序列RNA Oligo，miR-9-5p mimics序 列 為5’-UCUUUGGUUAUCUAGCUGUAUGA-3’，miRNA由蘇州吉瑪基因公司合成，用Lipofectamine 3000 （美國Life Technologies Corporation公司） 進行瞬時轉染。

1.2 RTCA實時增殖實驗

取對數生長期細胞轉染24 h后，消化并離心，去上清。加入有血清培養基重懸細胞，將細胞懸液與臺盼藍混勻，細胞計數儀讀取細胞數。根據細胞密度，將每個細胞樣品配置成固定濃度的細胞懸液。……