甲狀腺過氧化物酶抗體光激化學發光間接檢測法的建立

金 鑫 陳紅霞

(上海大學生命科學學院，上海 200444)

光激化學發光是以納米級高分子微粒為基礎的新一代化學發光技術，在免疫檢測中應用前景廣闊。具有快速、均相(免沖洗)、高靈敏和操作簡單的特點[1]。因其方法的核心特點為均相免沖洗(分離)模式，所以在實際運用中采用夾心法或者競爭法等可一步完成反應。目前還未在光激化學發光平臺上有間接法檢測的應用。

甲狀腺過氧化物酶(thyroid peroxidese，TPO)是一種糖基化血紅素蛋白，是甲狀腺細胞上的跨膜蛋白，其膜外區的部分酶具有催化活性[2]。甲狀腺過氧化物酶抗體(Anti-TPO)的檢測始于20世紀80年代，1985年Czarnocka等首先證實純化的微粒體抗原就是TPO，隨后建立了競爭性與非競爭性Anti-TPO免疫分析法(非競爭法多為間接法)[3]。目前Anti-TPO的檢測已經成為臨床自身診斷免疫性甲狀腺疾病，尤其是橋本氏甲狀腺病的重要參考指標[4]。檢測Anti-TPO的主流方法有酶聯免疫分析、化學發光免疫分析、時間分辨熒光免疫分析等[5]。

本研究通過制備免疫復合物IgG的多抗，將發光微粒偶聯TPO，生物素標記抗免疫復合物IgG抗體，建立了一步間接法用于檢測人血清Anti-TPO濃度的光激化學發光免疫檢測分析方法，并進行了該方法的性能評估。該Anti-TPO檢測法在Lica平臺上實現了間接檢測，也對現有的Anti-TPO檢測起到了方法學上的補充作用。

1 材料與方法

1.1材料

1.1.1實驗材料與試劑 人IgG和BCATM Protein Assay Kit購自賽默飛公司；乙肝核心抗原購自深圳菲鵬公司；重組TPO購自DIARECT AG；Anti-TPO國家標準品購自中國食品藥品檢定研究院；96孔反應微孔板購自浙江拱東醫療科技有限公司；……