自噬在紅景天甙誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞凋亡中的作用及機(jī)制①

榮 黎 李 桓 歐陽(yáng)凈 王 麗 池祥波 陳耀凱

(重慶市公共衛(wèi)生醫(yī)療救治中心，重慶 400036)

自噬作為Ⅱ型程序性細(xì)胞死亡，通過(guò)降解自噬成分清除蛋白質(zhì)異常聚集和受損細(xì)胞器調(diào)控細(xì)胞穩(wěn)態(tài)，與多種疾病發(fā)生密切相關(guān)[1-3]。在腫瘤發(fā)生發(fā)展中，細(xì)胞自噬呈“兩面性”，在腫瘤藥物治療中發(fā)揮不同作用[4-9]。

mTOR(mammalian target of rapamycin)是哺乳動(dòng)物雷帕霉素的靶點(diǎn)，在腫瘤細(xì)胞中表達(dá)上調(diào)從而抑制自噬，是調(diào)控細(xì)胞自噬的關(guān)鍵節(jié)點(diǎn)[10，11]。PI3K/AKT(磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B)作為腫瘤細(xì)胞中調(diào)控凋亡的經(jīng)典信號(hào)通路，同時(shí)也是mTOR的上游靶點(diǎn)，對(duì)于后者的激活起重要調(diào)控作用[12,13]。

本課題組前期功能實(shí)驗(yàn)已發(fā)現(xiàn)紅景天甙不僅能誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞凋亡，且能誘導(dǎo)自噬[14]。LC3(light chain 3)是自噬發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的重要標(biāo)志性蛋白，其表達(dá)水平與自噬水平相對(duì)應(yīng)[15]。本研究聚焦于自噬，探討自噬在紅景天甙促進(jìn)胃癌細(xì)胞凋亡中的作用及機(jī)制,為進(jìn)一步研究紅景天甙在胃癌中的治療作用提供參考。

1 材料與方法

1.1材料

1.1.1細(xì)胞株 人胃癌細(xì)胞株AGS由重慶醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院饋贈(zèng)。

1.1.2試劑與儀器 紅景天苷(南京格爾狄生物科技有限公司)，1640培養(yǎng)基(美國(guó)Hyclone),胎牛血清(美國(guó)Gibco),IGF-1、氯喹(美國(guó)Sigma Aldrich)，Hoechst33342、AV/PI細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒(北京碧云天生物公司)，Bcl-2、Bax、cleaved-Caspase3、cleaved-Caspase9、PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT、mTOR、p-mTOR、LC3b及Beclin-1抗體(上海abways technology)，腺病毒載體(上海Hansheng)，流式細(xì)胞儀(BD，Intra)，透射電鏡(Philips TECNAI20)，激光掃描共聚焦顯微鏡(Leica TCS-SP2)。

1.2方法

1.2.1細(xì)胞培養(yǎng)及分組 細(xì)胞培養(yǎng)于含10%胎牛血清的1640培養(yǎng)基，取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。以不含紅景天甙的1640培養(yǎng)基作為對(duì)照組，以40 μmol/L紅景天甙處理的胃癌細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)組;以10 μmol/L IGF-1和10 μmol/L氯喹(CQ)分別預(yù)處理胃癌細(xì)胞30 min作為干預(yù)組。……