非酒精性脂肪性肝炎小鼠模型的建立①

萬小雨 曾俊豪 張婉怡 韓钘雨 楊天心 王雅琴 周永芹 劉朝奇

(三峽大學腫瘤微環境與免疫治療湖北省重點實驗室，宜昌 443002)

非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholic fatty liver disease，NAFLD)是指除酒精和其他明確的損肝因素外所致的以肝細胞內脂肪過度沉積為主要特征的臨床病理綜合征，包括單純性脂肪肝炎(simple fatty liver，SFL)、非酒精性脂肪性肝炎 (nonalcoholic steatohepatitis,NASH)及相關肝硬化[1,2]。NASH是NAFLD疾病譜中的最重要組成之一，是NAFLD進展至肝硬化和肝細胞癌的重要環節[3,4]，因此建立動物模型探討NASH發生發展機制及尋找有效干預藥物尤為重要。目前高脂飲食所致NASH的動物模型多有報道，但造模周期平均為3～5個月，甚至長達1年，無法滿足藥物高通量和快速篩選的需求[5-7]。近年研究發現NAFLD發展機制的重要環節：腸肝軸，即腸道、肝臟和血液代謝之間的相互作用探討給予調控NAFLD的進程[8，9]。本實驗采用不同濃度葡聚糖硫酸鈉(dextransulfatesolin,DSS)對結腸造成不同程度的損傷，短期內成功再現NASH的動物病理模型。

1 材料與方法

1.1材料

1.1.1實驗動物 雄性昆明小鼠80只，4～6周齡，體質量(18±2)g，由三峽大學實驗中心提供，SPF級環境飼養。于恒溫(20±2)℃及濕度(50±2)%條件下，人工照明明暗各12 h，適應性喂養2 d后隨機分組。

1.1.2試劑 DSS購自上海翊圣生物科技有限公司，相對分子量為(36～50)×103；膽固醇購自國藥集團化學試劑有限公司；總RNA提取試劑盒和逆轉錄試劑盒購自大連寶生物科技有限公司；PCR引物由生工生物工程(上海)股份有限公司合成。

1.1.3動物飼料 普通飼料由三峽大學實驗動物中心提供。高脂飼料配方為普通飼料53.5%、果糖20%、豬油20%、膽固醇5%、食鹽1%、膽酸鈉0.5%，混合固定成形，送至武漢農科院輻照滅菌備用[10]。……