E2F1通過調節自噬相關蛋白表達促進卵巢癌細胞耐藥

李千會，陳說，趙楊

（中國醫科大學附屬第一醫院婦科，沈陽 110001）

卵巢癌是最致命的女性生殖系統惡性腫瘤，死亡率較高［1］。卵巢癌在早期階段沒有明顯癥狀，因此，大多數患者在初診時已處于晚期［2］。腫瘤切除手術聯合鉑類藥物化學治療（簡稱化療）可用于多種實體腫瘤的治療。順鉑自1989年開始被廣泛用于治療卵巢癌，但許多患者可出現順鉑耐藥及腫瘤復發，且順鉑耐藥的具體機制目前尚不明確［3］。E2F轉錄因子1（E2F transcription factor 1，E2F1）屬于E2F轉錄因子家族，參與多種腫瘤的發生、發展和耐藥［4-7］。本研究組在前期研究［8］中發現，E2F1可通過調節miR-519d/RhoC途徑促進卵巢癌的發生和發展。然而，E2F1是否參與卵巢癌耐藥尚未見文獻報道。因此，本研究擬探討E2F1在卵巢癌細胞耐藥中的作用及其可能的機制。

1 材料與方法

1.1 細胞培養和轉染

用含10%胎牛血清、100 U/mL青霉素、100 μg/mL鏈霉素的DMEM培養基（美國HyClone Logan公司）培養人卵巢癌細胞株A2780。另用含20 ng/mL順鉑的DMEM培養基培養人卵巢癌順鉑耐藥株A2780/DDP。在常規培養期間，每2 d更換1次培養基。按照說明書用lipofectamine 3000（美國Invitrogen公司）進行細胞轉染，分別用E2F1過表達質粒及小干擾RNA（small interfering RNA，siRNA）轉染A2780/DDP細胞，上調或下調E2F1的表達。

1.2 MTT

將細胞消化后接種于96孔板中（3×103/孔），孵育12 h，加入不同濃度的順鉑。待細胞培養48 h后加入5 mg/mL MTT（中國Solarbio公司）20 μL/孔，37 ℃孵育4 h，除去培養基/MTT溶液，加入DMSO（150 μL/孔）。使用微孔板分光光度計（美國Bio-Tek Instruments公司）測量吸光度。

1.3 RT-PCR

用TRIzol試劑盒（日本TaKaRa公司）從A2780、A2780/DDP及分別轉染了E2F1過表達質粒和si-RNA的A2780/DDP細胞中提取總RNA，按照說明書逆轉錄cDNA。基于GenBank序列設計引物。使用SYBR Premix Ex TaqTMⅡ試劑盒（日本TaKaRa公司）進行RT-qPCR擴增。GAPDH用作內參基因?！?br>